С. 4 ГОСТ 25755—91
20 еС и оттаивают при 37 X , содержимое объединяют и использу
ют для заражения ново» партии культуры клеток.
2.1.4. Оценка результатов
Пробу испытуемого материала считают отрицательной, если в
третьем пассаже не будет обнаружено цнтопатнческос действие
вируса. ЦПД вируса в культуре клеток устанавливают по наличию
округления клеток,носящего вначале очаговый или диффузный
характер с последующим отделением их от стекла. При наличии
ЦПД в культуре клеток проводят идентификацию выделенного
вируса.
2.2. Метод и д е н т и ф и к а ц и ив и р у с а
Сущность метода заключаетсяв нейтрализующем действии
антител специфической пшериммунной сыворотки, которые подав
ляют способность вируса вызывать ЦПД в культуре клеток.
2.2.1. Аппаратура, материалы, раствори, реактивы и питатель
ные среды по п. 2.1.1.
2.2.2. Проведение исследования
Перед постановкой реакциинейтрализации специфическую и
отрицательную сыворотки разводит в соотношении 1:10 питатель
ной средой для культуры клеток и прогревают в водяной бане при
56X в течение 30 мин. В два ряда пробирок (по семь пробирок в
:аждом ряду) вносят по 2 см* сыворотки: в пробирки первого ря
да — специфическую, второго ряда — отрицательную сыворотку.
Готовят десятикратные разведения испытуемого вируса от 10*‘
до 10"’ на питательной среде для культуры клеток в объемах,
достаточных для постановки реакции, вносят разведенный вирус
п два ряда пробирок с сывороткой, начиная с разведения 10 7, в
объеме 2 см1 на пробирку. Пробирки со смесью разведенного ви
руса и сывороткой встряхивают и выдерживают 1 ч в термостате
при 37 X . Затем по I см3 каждой смеси сыворотки с разведения
ми вируса вносят в четырепробирки с культурой клеток. Для
контроля служат незаряженные культуры клеток (отрицательный
контроль) и инфицированные разведениями вируса без сыворотки
(положительный контроль). Пробирки инкубируют в термостате
при 37X . Результатыреакцииучитывают по цитопатичсскому
действию вируса на 5 -7 сут.
При этом признаки ЦПД в пробирках с незаряженной культу рой
клеток должны отсутствовать и быть четко выражены в по
ложительном контроле.
2.2.3. Оценка результатов
Вычисляют по методу Рида и Менча или Кербера титр пшн-
руемого вируса в присутствииспецифической и отрицательной
сывороток, выражаемый в ТЦД 50/см3. Разность в титрах вируса
с отрицательной и специфической сыворотками не менее чем на
два логарифмасвидетельствует о принадлежности возбудителя
к вирусу бычьего герпеса типа 1.