С. 10 ГОСТ 25755-fll
2 5.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Аппаратура, материалы и реактивы — по пп. 2.1.1 и 2.1.2.
2.5.2. Проведение исследования
Исследуемые сыворотки прогревают в водяной бане при 56 X
в течение 30 мин. Готовят двукратные разведения исследуемых
сывороток от 1:2 до 1:64 в объеме 0.5 см3 на питательной среде
для культуры клеток с антибиотиками. Затем готовят необходи
мый объем вируса, содержащего 100 ТЦД 50 в 0,1 см3 и добавля ют
его в количестве 0,5 cvs в каждую пробирку с сывороткой со
ответствующего разведения. Смесь сыворотки и вируса встряхи
вают. выдерживают в термостате в течение I ч при 37 X . после
чего в четыре пробирки с культурой клеток вносят по 0,2 см3
смеси сыворотки и вируса и по 0.8 см’ поддерживающей, среды с
антибиотиками. Контролем служат пять пробирок с иеэараженной
культурой клеток, в которых производят смену питательной сре ды.
Для контроля 100 ТЦП вируса готовят десятикратные разве
дения его, начиная с исходного до 10 1 (исходное разведение со
ответствует- рабочем}, разведению вируса, взятого для постановки
реакции). В пробирки с культурой хлеток вносят (по четыре про
бирки на каждое разведение) разведение вируса по 0,1 см1 и по
0.9 см’ среды. Опытные п контрольные пробирки помещают
d
тер
мостат при 37 X.
2.5.3. Оценка результатов
Контроль дозы вируса проводят после проявления ЦПД виру
са в контрольном ряду пробирок. Цитопатичсское действие вируса
до’жко отмечаться в разведениях — исходном, 10-1, 10-* (не ме-
нео двух пробирок) В разведении 10 3 ЦПД должно отсутство
вать.
В пробирках с незараженной культурой клеток ЦПД не дол
жно наблюдаться.
Титром сыворотки считают предельное ее разведение, задер
живающее развитие цитопатического действия вируса в 50 % за
раженных культур клеток. Положительной считается сыворотка,
нейтрализующая 100 ТЦД вируса в разведении-1:2 и выше. Ретро
спективныйдиагнозна инфекционный рннотрахеит ставят при
двух-, четырехкратном и более приросте антител в пробах сыво
роток крови переболевших животных.
2.6.Ме т о др е а к ц и ин е п р я м о йг емаггл юти на
ции (РИГА)
Сущность метода заключается в способности антител исследуе
мой сыворотки вызывать агглютинацию эритроцитов с адсорбиро
ванным иг их поверхности специфическим ИРТ антигеном.
2.6.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Аппарат для мнкротнтровання типа «Такачи», «Титртск» или
ыикропнпеткн.