ГОСТ 23755-91 С. 3
Д 50/см8.
Вирус инфекционного ринотрахеита с титром не ниже 1040
ТЦ
Сыворотка гилернммунная специфическая к вирусу инфекци
онного ринотрахеита с титром не ниже 1:64.
Сывороткаотрицательная, нс содержащая антител к вирусу
инфекционного ринотрахеита.
2.1.2. Подготовка к исследованию
2.1.2 1. Об р а б о т к ас м ы в о в
Флаконы с тампонами встряхивают в течение 2—3 мин. там
поны отжимают во флаконы и удаляют. Содержимоефлакона
встряхивают и затемцентрифугируют с частотойвращения
3000 мин 1 в течение 10—15 мин. Надосадочную жидкость пипет
кой переносят в пробирку, добавляют антибиотики, выдерживают от
2 до 4 ч при 4 X и используют для заражения культуры кле
ток.
2.1.22. О б р а б о тк а о р г а н о в
Из кусочков органов готовит 10—20 %-ную суспензию на ра
створе Хс-нкса, содержащем антибиотики. Суспензию центрифуги
руют с частотой вращения 5000 мин 1 в течение 20 мин. Надоса
дочную жидкостьпипеткойпереносят в стерильную пробирку,
выдерживают при 4—6°С в течение 16—18 ч. затем используют
для заражения культуры клеток..
2.1.2.3. Об р а б о т к а с п е р м ы
Пробы спермы размораживают, разбавляют 1:10 питательной
средой для культур клеток с добавлением антибиотиков, замора
живают 2—3 раза при минус 15—40 °С, оттаивают при 37—38°С.
центрифугируют с частотой вращения 2000 мин-1 в течение
10 мин. надосадочную жидкость используют для заражения куль
туры клеток.
2.1.3. Проведение исследовании
Для выделения вируса из пробирок с монослоем культуры кле
ток удаляют росгоную среду и вносят по 0,2—0,3 см5 каждого
испытуемого материала — по 4--5 пробирок на каждую пробу.
Пробирки выдерживают при 37°С в течение 1 ч, затем из них
удаляют внесенную испытуемую жидкость. Монослой 2—3 раза
ополаскивают питательной средой для культур клеток с антибио
тиками и добавляют по 1,0
c
m
j той
же среды.
Контролем служат 4—5 пробирок с незаряженной культурой
клеток, в которых проводят смену ростовой питательной среды.
Пробирки с испытуемым материалом и контрольные инкубируют
при 37 X о течение 5—6 сут, ежедневно мнкроскопируя для учета
ЦПД вируса.
Для выделения вируса проводят три последовательных пасса
жа с интервалом 5—6 сут. Перед проведением повторного пассажа
пробирки с испытуемымматериалом замораживают при минус
2 Зах 361 ’