ГОСТ 25755-91 С. 7
1
До исследования или первичной обработки смывы хранят при
4- 6*0 нс более 24 ч. Перед исследованием тампоны отжимают
и удаляют, а оставшуюся жидкость центрифугируют с частотой
вращения’3000-1 в течение 15- 20 мин.Нздосадочную жидкость
отбрасывают, а осажденные на дно пробирки клетки,ресуспенди-
руют и повторно отмывают центрифугированием в растворе Хенк-
са к.*и физрастворе (pH 7,2). После удаления надосадочной жид
кости клеточный осадок суспендируют в 0.03 -0,06 см} дистилли
рованной воды, добавляют к нему равный объем гидроокиси нат
рия с массовой концентрацией I моль/дм3, выдерживают 10 мин
при плюс 68X . охлаждают в бане со льдом 3- 5 мни и добавля
ют такой же объем (0.03--0.06 см3) буфера № 3.
23.2.5. Об р а б о тк а о р г а н о в
Из кусочков органов готовят 10—20 %-ную суспензию в 0.5 см5
растворе Хенкса или физраствора.
Добавляют к суспензии 0,15 cxi3 раствори додецнлеульфата
натрия, выдерживают I ч при G8X, центрифугируют10 мни с
частотой вращения 2000 мш г\ отсасывают 0.5 см3 раствора фено
ла и перемешивают н течение 1 мни, после чего центрифугируют
с частотой вращения 2000 *. Верхний слой переносят в отдельную
пробирку л добавляют к нему 0.6 см3 хлороформа, закрывают
пробкой, перемешивают 20 с, центрифугируют 10 мин с частотой
вращения 2000 мни-1, отсасывают верхний слой и переносят в дру
гую пробиркуДобавляют0,06 см3 раствора ацетата натрия и
1.2 см* *?6% этилового спирта, выдерживают от 8 до 10 ч при
температуре от минус 10 до минус 20X . Пробирки
центрифуги руют. сливают надоендочную жидкость, осадок
промывают цент рифугированием в 0.5 см3 96 с,о этилового
спирта и высушивают
30 мин при 68 X в открытой пробирке. Сухие осадки растворяют
в 0.04 СТ3 раствора гидроокиси натрия концентрацией 0,5 моль/дм3,
выдерживают 10 мин при 68X , охлаждают 3—5 мин, помещая
пробирку в лсд. добавляют 0.02 см3буфера Me3.
2.3.2.6. Об р а б о т к ас п е р м ы
Исследованию подвергают свеженолученные. замороженные в
жидком азоте или высушенные на стекле или полистироле образ
цы спермы объемом 0,15 смИсследуемые образцы разводят до
o6v ма 0,5 с.\
1
! буферным раствором .V? 5 (высушенные образцы
при этом вначале суспендируют в 0,015 см3 дистиллированной
поды). Добавляют к образцам по 0,02 см3 рабочего растнора до-
дешмеульфата натрия и выдерживают 1 ч при 37X . Дальнейшая
обработка спермы проводится, как указано в и. 2.3.2.5.
2.3.3. Проведение исследования
Подготовленные дляисследованияпробы наносят в объеме
0.005 см3 на капроновый фильтр, начиная с клетки N? 5. На клет
ках № 1—2 адсорбирована ДНКвируса ИРТ (положительный
контроль), на клетках Nt 3—4 отрицательный контроль.