С. 16 ГОСТ 25755-91
1
кой плотности (ОП.|5о).
разведения сывороток от 1:200 до1:1600. Из последних лунок
каждого ряда по 0,1 см3содержимого удаляют.
Микролянсли закрывают крышкой и выдерживают при 37 °С
в термостате I—1,5 ч.
2.7.3.3. В н е с е н и е к о н ъ ю г а т а
Все лунки микропанелей промывают три раза но 5 мин инку
бационным буферным раствором, как указано в п. 2.7.3.1, вносят
по 0,1 см3 рабочего раствора иммунофсрмснтного конъюгата, под
готовленного, как указано в п. 27.2.2, и инкубируют в термостате
при 37 °С 1 ч.
Промывают три раза по 5 мин инкубационным буферным раст
вором.
Вносят субстратный буферный раствор по 0,1 см1 во все лунки
микропанелей и выдерживают их в темноте при комнатной темпе
рае 10—30 мин.
тем реакцию останавливают, добавляя в каждую лунку ра
створа серной кислоты в объеме 0,05 см3.
2.7.4. Оценка результатов
Результаты оценивают визуально или при помощи спектрофо
тометра не позднее 3 ч после остановки реакции.
Визуальная оценка. При наличии специфических антител (по
ложительная проба)рядлунок с исследуемыми сыворотками
имеет оранжево-коричневое окрашивание в разведениях сыворот ки
1:200. сравнимое с цветом раствора в положительном контроле
(3-й горизонтальный ряд мнкропанели).
Отрицательными считают пробы, не изменившие окраску, или
имеющие слабое .пожелтение, аналогичное цвету отрицательных
контролен.
Спектрофотометрический учет. Регистрацию результатов реак
ции проводят на специальных фотометрах с вертикальным лучом
при длине волны 490 им. Результаты выражают в единицах опти
чес
Положительными считают пробы, ОП4» которых, начиная с
разведения 1:200,
r
два и более раз превосходит уровень оптичес
кой плотности отрицательного контроля, но при этом не должен
быть ниже 0,200 ед.
Сомнительными пробами считают такие пробы, ОП«оо которых
выше отрицательного контроля и составляет 0,150 -0,199 ед.
Уровень оптической плотности ниже 0,150 сд. свидетельствует
об отрицательной реакции.
Основанием для постановки диагноза на ИРТ является увели
чение титра антител в парных пробах сывороток в 2 и более раз.
При этом учитывают эпизоотическую ситуацию в хозяйстве, нали
чие клинических и патологоанатомическнхпризнаков заболева
ния.
Обнаружение положительных проб при эпизоотологическом