ГОСТ Р 52616—2006
вень среды был ниже на 1 см нижнего кольца резиновых пробок. В таком виде среда может храниться
при температуре {4 ± 2) °С длительное время, не утрачивая своих свойств.
Для испытания используют четыре ампулы с сухой или четыре флакона или ампулы с жидкой вак
циной. Содержимоо каждой ампулы с сухой вакциной разводят стерильным физиологическим раство
ром в половине объема, указанного на этикетке коробки с ампулами, используя для каждой ампулы
отдельный флакон. С целью повышенияконцентрации жидкой вакцины иуменьшения содержания вней
глицерина флаконы с вакциной отстаивают при температуре (4 ± 2) °С втечение 5— 7 сут. После отстоя из
каждого флаконаудаляют тричетверти надосадочнойжидкости, а осадок разводят всоотношении 1:2
стерильным физиологическим раствором. Вместо отстаивания можно использовать центрифугирова
ние при (5—10)-103об/мин втечение 20—30 мин. надосадочную жидкость удаляют, а осадок разводят
стерильным физиологическим раствором до половины первоначального объема.
После разведения сухой или концентрированной жидкой вакцины готовят две средние пробы. Для
этого по 5.0 см3 содержимого каждого из двух флаконов переносят в стерильный флакон, тщательно
перемешивают и закрывают флакон резиновой или ватно-марлевой пробкой.
Шприцы и инъекционные иглы стерилизуют путем кипячения вдистиллированной воде в течение
50—60 мин. Ватные тампоны заворачивают в пергаментную бумагу, помещают в бикс и стерилизуют в
автоклаве при температуре (120 ± 1) X в течение 1 ч.
Из каждой приготовленной пробыделаютпосевы по 1.0см3вдве пробирки сосредой «Казань» или
заражают пять белых мышей, взятых из группы заведомо здоровых животных, внутрибрюшинно вдозе 1
см3 (40—48 млн живых спор).
По истечении 10—18 ч инкубации при температуре (37 ♦ 1) °С из микробных культур, выросших в
среде «Казань», готовят мазки на обезжиренных предметных стеклах. Мазки высушивают на воздухе,
фиксируют всмеси Никифорова (одна часть этанола иодна часть эфира) в течение 15 мин. после чего
высушивают на воздухе и окрашивают синькой Леффлера в течение 15—20 мин. Краску смывают водо
проводной водой, предметные стекла с мазками высушивают и просматривают под иммерсионной сис
темой микроскопа.
Все или большинство зараженных белых мышей должны погибнуть в течение пяти суток. Выжив
ших мышейпоистечении указанногосрока подвергают эвтаназии. Избрюшного экссудата, сердца, пече
ни и селезенки павших белых мышей делают мазки-отпечатки на обезжиренных предметных стеклах,
фиксируют, окрашивают, как мазки со средой «Казань», и просматривают под иммерсионной
системой микроскопа. В качестве контроля используют 2-ю вакцину Ценковского.
7.14.3 Обработка результатов
В мазках микробной культуры штамма 55-ВНИИВВиМ. выросшей в среде «Казань», или в маз
ках-отпечатках из брюшного экссудата и органов павших мышей должны быть только бескапсульные
сибиреязвенные микробы. В контрольных пробах — капсульные формы микроба.
7.15 Определение безвредности
7.15.1 Материалы, реактивы и животные
Флаконы стеклянные вместимостью 50 см3.
Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336.
Пипетки стеклянные мерные исполнений 1. 2, 3, 4. 5. 6 вместимостью от 1.0 до 10,0 см3 по
ГОСТ 29230.
Пробки резиновые или ватно-марлевые.
Тампоны ватные.
Шприцы вместимостью 5 см3 по ГОСТ 22967.
Иглы инъекционные № 0416—0426 по ГОСТ 25377.
Вода дистиллированная по ГОСТ Р 51232.
Раствор физиологический с pH (7,0
±
0.2) (1).
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652.
Кролики массой 2.5—3,0 кг.
7.15.2 Подготовка к испытанию
Для проведения испытания используют смесь равных объемов вакцины из трех ампул или трех
флаконов, которую готовят по 7.7.1.2.
7.15.3 Проведение испытания
Трем клинически здоровым кроликам массой 2.5—3.0 кг вакцину вводят подкожно из расчета
200 млн спор в область наружной поверхности бедра в равных объемах в обе конечности.
13