ГОСТ Р 52616—2006
д/_ No_C(4)
100
7.8 Определение массовой доли спор
7.8.1 Аппаратура, материалы и реактивы
Микроскоп биологический марки МБИ поГОСТ8074 или любой марки сувелимением400• — 900’.
Устройство для наблюдения методом фазового контраста КФ4.
Стекла предметные для микропрепаратов по ГОСТ 9284.
Стекла покровные для микропрепаратов по ГОСТ 6672.
Раствор физиологический с pH (7.0 10.2) [1].
7.8.2 Проведение испытания
Для испытания используют сухую илижидкуювакцину, подготовленнуюпо7.7.1.2. Из приготовлен
ных вакцин делают разведение 10"1 на физиологическом растворе. Из разведения вакцины 10~1на
предметных стеклах готовят раздавленную или висячую каплю и просматривают ео под микроскопом
при кратности увеличения 400х— 900хвфазовом контрасте. Вкаждом поле зренияотдельно подсчиты
ваютсибиреязвенныеспорыипалочки. Общеечисло подсчитанных клеток(спор ипалочек)должнобыть
не менее 200.
7.8.3 Обработка результатов
Массовую долю спор С, в вакцине. %. вычисляют по формуле
сW4_I00(5)
"з
где Л/4 — число подсчитанных сибиреязвенных спор;
100 — постоянный коэффициент;
А/3 — общее число подсчитанных клеток (спор и палочек).
Массовая доля спор должна составлять (95,0 ± 5,0) %.
7.9 Определение микробиологической чистоты
7.9.1 Аппаратура, материалы и реактивы
Микроскоп биологический марки МБИ по ГОСТ 8074.
Флаконы стеклянные вместимостью 100 см3.
Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336.
Пробки ватно-марлевые.
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652.
Мясо-пептомиый бульон по ГОСТ 20730.
Мясо-пептонный агар по ГОСТ 29112.
Среда Сабуро по ГОСТ 28085.
Среда Кигт-Тароцци (МППБ) по ГОСТ 28085.
7.9.2 Проведение испытания
7.9.2.1 Подготовка сред — по ГОСТ 28085.
7.9 2.2 Для испытания используют пять ампул или пять флаконов с вакциной. Содержимое каждой
ампулы с сухой вакциной разводят в стерильном физиологическом растворе в объеме, указанном на
этикетке коробки с вакциной, используя для каждой ампулы отдельный флакон. Из каждой пробы сухой
или жидкой вакцины делают посевы по 0.2—0,3 см3 в МПБ. МППБ под вазелиновым маслом, на МПА.
агар Сабуро вдве пробирки с каждой средой ипо0,5— 1,0 см3едвафлаконасМПБ иМППБ под вазелино
вым маслом. Через трое суток инкубирования посевов из флаконов с МППБ под вазелиновым маслом
проводят пересев на аналогичную питательную среду во флаконах. Посевы инкубируют в течение 10
сут, а пересевы 7 сут при температуре (37±1)°С, дляагара Сабуро — при температуре (22 ±2)°С.
В течение указанного времени посевы ежедневно просматривают на чистоту роста сибиреязвен
ной культуры. При затруднении дифференциации сибиреязвенной культуры от посторонней бактери
альной и грибной микрофлоры из микробных культур готовят мазки на обезжиренных предметных
стеклах. Мазки подсушивают на воздухе до полного высыхания, фиксируют над пламенем горелки и
окрашивают по Граму. Краску смывают дистиллированной водой, предметные стекла с мазками высу
шивают фильтровальной бумагой и просматривают под иммерсионной системой микроскопа.
7.9.3 Обработка результатов
Во всех питательных средах не должно быть роста посторонней бактериальной и грибной микро
флоры. В МПБ и на МПАдолжен быть типичный рост культуры штамма 55-ВНИИВВиМ. В мазках, приго-
Ю