ГОСТ Р 52616—2006
ведений вакцины (1 0 -5. 10~6), начиная с последнего, стерильной микропипеткой делают высевы в
чашки Петри с агаром. Каждым разведением вакцины засевают три чашки Петри с агаром, внося в каж
дую по 0.1 см3 взвеси спор.
После равномерного распределения стерильным шпателем посевного материала поповерхности
агара чашки Петри переносят в термостат, ставят вверх дном и выдерживают при температуре (37
± 1) °С в течение 18—24 ч. При распределении посевного материала каждого разведения вакцины
пользуются отдельным стерильным шпателем.
7.7.1.3 Обработка результатов
По истечении указанноговремени подсчитывают количество выросших колоний вкаждом разведе
нии вакцины и находят среднеарифметическое число колоний. Количество живых спор в 1 см3 вакци
ны
К,
млн, вычисляют по формуле
к = к>тК*
(U
1.1
где
Ks
— среднеарифметическое количество колоний, выросших в чашках из разведения 10-5 ;
Ке — среднеарифметическое количество колоний, выросших в чашках из разведения 10~в;
1.1— постоянный коэффициент.
Результаты определения концентрации спор в 1.2.3-м флаконах или ампулах суммируют, делят
на 3 и получают среднеарифметическое значение, которое принимают за окончательный результат
количества жизнеспособных спор в 1 см3 разведенной или неразведенной вакцины.
7.7.2 Определение количества живых спор ускоренным методом
Определение количества живых спор в 1 см3вакцины проводят вдва этапа: сначала определяют
общее количество спор в 1 см3 вакцины, затем — массовуюдолю вней живых спор в процентах. После
этого путем расчета определяют действительное число живых спор в 1 см3 вакцины.
7.7.2.1 Аппаратура, материалы и реактивы по 7.7.1.1.
7.7.22
Для подсчета общего количества спор в 1 см3вакцину, подготовленную по 7.7.1.2. разво
дят всоотношении 1:5 физиологическим раствором. Полученной взвесьюспор заполняют обычным спо
собом камеру Горяева. Через 10 мин под микроскопом (объектив 40. окуляр 7 или 10) проводят подсчет
спор в пяти больших квадратах, расположенных подиагонали, и находят среднеарифметическое коли
чествоспорводном большом квадрате. Общее количествоспор в 1см3вакцины W0. млн. вычисляют по
формуле
A/0 = Wr1.25,(2)
где Л/, — среднеарифметическое количество спор в большом квадрате;
1.25— постоянный коэффициент.
Заокончательный результатпринимают среднеарифметическое результатов трехonределений.
7.7.2.3 Определение массовой доли живых спор
Для этого на предметное стекло стерильной пастеровской пипеткой наливают тонкий равномер
ный слой расплавленного агара (МПА. СВК. КД). После его застывания стерильной пипеткой наносят
каплю вакцины, подготовленной по7.7.1.2. и. наклоняя стекло вразные стороны, равномерно распреде
ляют каплю поповерхности агара. Предметное стекло с высеянной вакциной помещаютвчашкуПетри, в
которую для создания влажности кладуткусочек ваты, смоченной водой, ичашку Петри ставятвтермос
тат с температурой (37 * 1) вС.
По истечении 2 ч участок засеянной поверхности агара (МПА. СВК. КД) просматривают под иммер
сионной системой микроскопа с фазовоконтрастным устройством (объектив 90. окуляр 7 или 10). для
чего на него предварительно помещаютпокровное стекло. В каждом поле зрения отдельно подсчитыва
ютсибиреязвенныепалочкиинепроросшиесибиреязвенные споры. Общеечисло подсчитанныхклеток
(сибиреязвенных палочек и спор) должно быть не менее 500.
Массовую долю живых спор в вакцине С, %, вычисляют по формуле
с
= ^
2_100
(
3
)
где
N2
— число подсчитанных сибиреязвенных палочек;
W3— общее число подсчитанных клеток (палочек и спор);
100— постоянный коэффициент.
7.7.2.4 После определения общего числа спор
Na
в 1 см3вакцины идоли в ней живых спор
N,
%,
проводят вычисление числа живых спор
N
в 1 см3 вакцины, млн, по формуле
9