ГОСТ Р 52616—2006
товленных из микробных культур и окрашенных по Граму, должна быть сибиреязвенная культура
штамма 55-ВНИИВВиМ.
7.10 Определение типичности роста культуры штамма 55-ВНИИВВиМ
7.10.1 Аппаратура, материалы, реактивы по7.7.1.1. и7.9.1 иагар кровяной по нормативному доку
менту.
7.10.2 Проведение испытания
Питательныесреды (МПБ иМПА) ииспытуемую вакцину готовятпо7.9.2. Определение типичности
роста проводят путем посева исследуемойсерии вакцины по0.2—0.3 см3вдве пробирки сМПБ.две про
бирки с МПА и по 0.3— 1.0 см3едва флакона вместимостью 50.0 см3 или 100.0 см3с МПБ. а также бакте
риологической петлей штрихами (для получения отдельных колоний) на три чашки Петри с МПА и три
чашки с кровяным агаром. Через 5 сут инкубирования посевов из флаконов с МПБ проводят пересев на
аналогичную среду во флаконах. Посевы выдерживают в течение 10 сут и ежедневно просматривают
визуально на типичность роста сибиреязвенной культуры штамма 55-ВНИИВВиМ. пересевы — 5 сут, а
посевы на кровяной агар и МПА на чашках Петри — 1 сут при температуре (37
±
1) 0С.
7.10.3 Обработка результатов
В посевах вакцины в МПБ должен быть характерный рост сибиреязвенной культуры штамма
55-ВНИИВВиМ с образованием на дне пробирки или флакона рыхлого осадка, а на поверхности сре
ды — пристеночного кольца. Бульон должен быть прозрачным или с небольшой опалесценцией.
При встряхивании пробирки или флакона с посевами осадок разбивается вгомогенную взвесь.
Недопустим рост с образованием пленки, помутнением среды. На поверхности МПА должен быть
рост культуры штамма 55-ВНИИВВиМ в виде серовато-беловатых, круглых, шероховатых, с
серебристым оттенком колоний R-формы. диаметром 3—4 мм.
На кровяном агаре через 24 ч инкубирования должны формироваться серовато-беловатые, круг
лые и шероховатые колонии диаметром 2—4 мм без признаков гемолиза. В последующиедни гемолиз
возможен.
7.11 Определение морфологических свойств штамма 55-ВНИИВВиМ
7.11.1 Аппаратура, материалы и реактивы по 7.7.1.1.
7.11.2 Проведение испытания
Из 24—46 ч микробных культур, выращенных вМПБ и на МПА по 7.10.2, готовят мазки иокрашива
ют их по Граму. которые просматривают под иммерсионной системой микроскопа.
7.11.3 Обработка результатов
Вмазках,окрашенныхпо Граму,должна быть типичная ичистая культура штамма 55-ВНИИВВиМ в
видеоднородных стройных палочек икоротких цепочек темно-синего (фиолетового)цвета, а спорыдол
жныбыть овальной формы,блестящие (неокрашенные), находящиеся вцентревегетативной клетки или
вне ее. Инволюционные формы (извитые, округлые и т.д.) должны отсутствовать.
7.12 Определение однородности культуры штамма 55-ВНИИВВиМ
7.12.1 Аппаратура, материалы и реактивы по 7.7.1.1. и 7.9.1 со следующим дополнением:
Сердце крупного рогатого скота [3].
Поджелудочная железа крупного рогатого скота по ГОСТ 11285.
Хлороформ по ГОСТ 20015.
Вода мясная по ГОСТ 20729.
Агар пищевой по ГОСТ 16280 или агар микробиологический по ГОСТ 17206.
Вода водопроводная по ГОСТ Р 51232.
7.12.2 Проведение испытания
При испытании используют 1,3 %агара натриптическом переваре сердца,для приготовления кото
рого берут 6.6 кгсвежих бычьихсердец,очищенных отжира, режут на кусочки иварят 10—15мин в10дм3
водопроводнойводыпри постоянном перемешивании. Мясопропускаютчерез мясорубку. Отвар охлаж
даютдо температуры (50 ± 5)°С. добавляяхолодную водудо первоначальногообъема. Отвар подщела
чивают 20 %-ным раствором NaOH до pH 7.8—8.0. Отвар и мясной фарш помещают в бутыль, куда
добавляют1.32 кгподжелудочной железы, 100 см3хлороформа ивыдерживают втермостате при темпе
ратуре (48 ± 1) “С втечение 7 сут. Первые трое суток перемешивают через каждые 30 мин. периодически
проверяя, чтобы pHсоставлял 7,8—8.0. Затем перемешиваютодин развсутки изадвоесутокдо оконча
ния гидролиза перемешивание прекращают. Фильтруют через полотняный фильтр, стерилизуют при
температуре (110 ± 5) X в течение 30 мин.
11