С. 9 ГОСТ 26972-86
Через 24 ч проводят предварительный, а через 48 ч — окончательный учет посевов.
Просматривают каждую пробирку и регистрируют те из них, в которых имеется рост микро
организмов (газообразование, изменение цвета среды, помутнение и другие признаки).
Из пробирок с признаками роста микроорганизмов на среде п. 3.2.16 делают пересевы петлей
на поверхность плотной среды, приготовленной по п. 3.2.19 или по п. 3.2.20, штрихами так, чтобы
получить рост изолированных колоний. Посевы термостатнруют при температуре (37 ± 1) *С
в течение 24 ч. После термостатирования посевы просматривают и отмечают рост колоний,
характер ных для бактерий группы кишечных палочек: на среде Эндо — плоские или слегка
выпуклые, или с валиком, красные с различной интенсивностью окраски, розовые, бледно-
розовые с металличес ким и без металлического блеска; на среде ЛЛКЖ-ярко или светло-
розового, розово-фиолетового цвета, часто с более светлым или бесцветным краем. 1—3 мм в
диаметре, под которыми иногда образуется прецишггат розового цвета в виде пятна.
Из пробирок с ростом микроорганизмов на средах по пп. 3.2.17 и 3.2.18, а закже из не менее,
чем пяти характерных колоний, выросших на плотной среде, делают препараты и окрашивают их
по Граму. Для этого на обезжиренное предметное стекло наносят петлей одну каплю стерильной
дистиллированной или водопроводной воды и в ней растирают материал, взятый из посевов
на жидких средах или из характерной колонии на плотной среде. Допускается из жидких сред
препарат готовить без воды. Мазок на предметном стекле фиксируют трехкратным проведением
через пламя горелки. На препарат накладывают полоску фильтровальной бумаги и на нее наливают
карболовый раствор генциан виолегл на 0.5—1.0 мин. снимают бумагу, наливают раствор Люголя на
0,5—1,0 мин, сливают раствор Люголя и стекло прополаскивают в этиловом спирте в течение 0,5—
1.0 мин. пока не перестанет отходить краситель. Затем мазок тщательно промывают водой и
докрашивают 1—2 мин фуксином Циля, разведенным дистиллированной водой в соотношении 1 ;
9.
После промывки и просушивания препарата фильтровальной бумагой мазок микроскопируют.
Микроорганизмы, красящиеся по Граму, окрашиваются в сине-фиолетовый цвет основного
красителя, не красящиеся по Граму — в розовый цвет дополнительного красящего раствора.
Бактерии группы кишечных палочек являются грамотрицательнымн короткими палочками.
Если после просмотра окрашенных по Граму препаратов не обнаружены грамотрицательные
короткие палочки, то дают заключение об отсутствии бактерий группы кишечных палочек в анали
зируемом продукте.
Если хотя бы водном окрашенном по Граму препарате будут обнаружены грамотринателызые
короткие палочки, то считают, что в продукте присутствуют бактерии группы кишечных палочек.
При определении наиболее вероятного числа бактерий группы кишечных палочек в 1гпродукта
учитывают число пробирок, в которых подтвержден рост бактерий группы кишечных палочек,
пользуясь таблицей, приведенной в обязательном приложении 2.
4.2.3. Обработка результатов
Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.
При определении бактерий группы кишечных палочек в определенной массе продукта резуль
тат записывают как «обнаружены* или «не обнаружены* бактерии группы кишечных палочек в
анализируемой навеске.
Определение наиболее вероятного чиста бактерий группы кишечных палочек в 1 г продукта
проводят с помощью таблицы НВЧ микроорганизмов следующим образом.
В каждом ряду из трех пробирок, засеянных соответственно продуктом и его двумя последо
вательными разведениями, отмечают число положительных пробирок. По количеству учтенных
положительных пробирок составляют трехзначное число, по которому, пользуясь таблицей, приве
денной в приложении 2, находят НВЧ бактерий группы кишечных палочек в 1 г. Пример опреде
ления НВЧ приведен в приложении 3.
4.3. Метод определения количества плесневых грибов и дрожжей
4.3.1. Сущность метода
Метод основан на высеве разведений определенного количества продукта в селективную
агаризованную среду, культивировании посевов при (24 х 1) "С в течение 120 ч, подсчете всех
видимых колоний плесневых грибов и дрожжей, типичных по макро- и (или) микроскопической
морфологии и пересчете их количества на 1 г продукта.
4.3.2. Проведение анализа
По 1 см’ из 10_| и 10" * разведений, приготоатеиных по п. 3.3.6, высевают параллельно в две
чашки Петри. В каждую чашку Петри, содержащую исследуемый материал, добаатяют не позднее.