ГОСТ I» ИСО 10993.11-99
Б.З Исследования на пирогснность метолом реакции связывания комплемента
Б.3.1 Приготовление вытяжек
Б.З. 1.1 Приготавливают вытяжки (смывы) из конкретных изделий согласно нормативной документации
(НД) на приготовление вытяжек (смывов) из этих изделий.
Б.3.2 Применяемое оборудование
Стенд для испытаний по ГОСТ Р ИСО 1U993.5.
Пробирки с притертой пробкой. 10 шт., объемом по 3 мл.
Дозатор пинеточный объемом 0.S; 0,2: 0,1; 0,05; 0.02 мл.
Весы аналитические с погрешностью взвешивания нс более 0.001 г.
Пинцет анатомический длиной 250 мм.
Сосуд Дьюара. 2 шт.
Стерилизатор воздушный медицинский, температура (1804-2) ’С.
Холодильник бытовой.
Термостат с максимальной температурой 50 *С.
pH-метр, тип pH-121.
Применяемые реактивы.
Хлорид натрия, стерильный апирогенный изотонический распор 0.9 %-ный.
Сперма быка (замороженная в жидком азоте).
Антитела (замороженные в жидком азоте).
Комплемент (замороженный в жидком азозе).
Липополисахарид (в ампуле).
Б.3.3 Готовят распор антител. Замороженную гранулу антител из сосуда Дьюара берут длинным
анатомическим пинцетом и помешают в сухую пробирку.
Б.3.4 Готовят распор антигена. Вскрывают ампулу с лимомолисахаридом. содержащую 500 минимальных
пирогенных доз в 1 мл. 0.1 мл этого препарата приливают в пробирку с 0,9 мл апирогенного распора хлорида
натрия. Приготовленный раствор тщательно перемешивают, при этом концентрация антигена ннем составляет
50 минимальных пирогенных доз в 1 мл.
Б.3.5 Готовят распор комплемента. Гранулу замороженного комплемента длинным анатомическим
пинцетом помещают всухую пробирку при комнатнойтемпературе и выдерживают в течение 10 мин до полного
оттаивания.
Б.3.6 Готовят опытный образен. В пробирку с притертой пробкой наливают 1 мл вытяжки (смыва), а
также антитела и комплемент согласно паспорту. Содержимое пробирки перемешивают встряхиванием.
П р и м е ч а н и е —За образец принимают часть вытяжки, подвергаемую необходимому исследованию.
Б.3.7 Готовят отрицательный контрольный образец. В пробирку с притертой пробкой наливают I мл
апирогенного раствора хлорида натрия, а также антитела и комплемент согласно паспорту. Содержимое
пробирки перемешивают встряхиванием.
Б.3.8 Готовят положительный контрольный образец. В пробирку с притертой пробкой наливают 1 мл
апирогенного раствора хлорида натрия, добавляют 0.02 мл раствора антигена, полученного всоответствии с Б.3.3, и
добавляют антитела и комплемент согласно паспорту. Содержимое пробирки перемешивают встряхиванием.
Б.3.9 Опытный и контрольные образны помещают в термостат. Проводят инкубацию втечение 18 — 24 ч
при температуре (27 ± 2) ‘С в термостате.
Б.З. 10 Готовят биосемсорную систему. Отмеряют пипеткой в пробирки объем разбавителя, указанный
в паспорте, и ставят их в водяную баню при температуре (41)± 1,5) ‘С. В каждую пробирку добавляют объем
антител, указанный в паспорте, и тщательно перемешивают встряхиванием. Охлажденным до температуры
жидкого азота длинным анатомическим пинцетом извлекают из сосуда Дьюара гранулу спермы и опускают в
нагретый раствор. После отпивания гранулы содержимое пробирки перемешивают и выдерживают 10
мин. НЕ ДОПУСКАЕТСЯ ОТТАИВАТЬ НЕСКОЛЬКО ГРАНУЛ В ОДНОЙ ПРОБИРКЕ! Содержимое
пробирок сливают в одну и перемешивают встряхиванием. Получается маточный раствор спермы.
Б.З. 11 Готовят рабочие образцы. В каждую пробирку контрольной и опытной серий добавляют но 0.2 мл
маточного раствора спермы.
Б.З. 12 Готовят пробы к исследованию на стенде. Каждый рабочий образец переносят в кювету. Затем
кювету (капилляр) устанавливают в кювегодержагсль (каретку) стенда для исследования.
Б.З. 13 Накапливают экспериментальные данные. При достижении нулевых значений показателя подвиж
ности во всех кюветах прекращают процесс накопления данных.
Б.З. 14 Обрабатывают экспериментальные данные с помощью компьютера. Суммарную двигательную
активность S. в условных единицах, каждого образца вычисляют по формуле
S **
I /И;.
I-
I
10