ГОСТ Р ИСО 20776-1—2022
не установлено иное. Для некоторых препаратов следует использовать альтернативные растворители
(см. приложение В).
Примечание — Информация о наиболее подходящих растворителе и разбавителе новых антимикроб
ных препаратов, не приведенных в приложении, должна быть указана в информации, предоставленной изгото
вителем. Стерилизация растворов обычно не требуется. При необходимости стерилизацию проводят с помощью
мембранной фильтрации; образцы до и после стерилизации сравнивают методом количественного анализа для
исключения адсорбции.
Если нет информации о стабильности базовых растворов при определенных условиях хранения,
то свежий базовый раствор следует готовить для каждой исследуемой партии.
4.3.3 Приготовление рабочих растворов
Диапазон концентраций, выбранных исследователем для тестирования, зависит от микроорганиз
ма и антимикробного препарата и должен обеспечивать определение требуемых диапазонов значений
МПК для соответствующих контрольных штаммов микроорганизмов.
Серию двукратных разведений антимикробного препарата готовят в бульоне Мюллера—Хинтон
из расчета 1 мг/л. Разведения следует готовить только согласно процедурам, изложенным в приложе
нии С. Рабочие растворы должны быть использованы в тот же день, если нет информации о стабиль
ности растворов при определенных условиях хранения.
4.3.4 Подготовка планшетов для микроразведений
В лунки планшета для микроразведений вносят по 50 мкл рабочего раствора с удвоенной к требу
емой конечной концентрацией антимикробного препарата или по 100 мкл раствора с конечной требуе
мой концентрацией.
Для контроля роста каждого исследуемого штамма должна использоваться как минимум одна
лунка, содержащая 50 или 100 мкл питательной среды без антимикробного препарата. Также не менее
одной лунки, содержащей 100 мкл питательной среды без антимикробного препарата, оставляют без
внесения инокулюма и используют в качестве отрицательного контроля каждого исследуемого штамма.
4.3.5 Хранение планшетов для микроразведений
Заполненные планшеты могут быть использованы немедленно или храниться в течение трех ме
сяцев, или до тех пор, пока отраженные в документах результаты контроля качества или другие дока
зательства не укажут на деградацию антимикробного препарата. Для хранения заполненные планшеты
должны быть запечатаны в полиэтиленовые пакеты и немедленно помещены в морозильную камеру
при температуре, не превышающей минус 60 °С, если нет информации относительно стабильности
антимикробного препарата при более высоких температурах.
Не допускаются хранение планшетов в морозильной камере с функцией саморазмораживания,
а также повторная заморозка размороженных антимикробных препаратов, так как повторные циклы
замораживания — оттаивания ускоряют деградацию некоторых антимикробных препаратов, особенно
(3-лактамов.
Замороженным планшетам дают оттаять в течение не более 2 ч и инокулируют в течение 4 ч по
сле изъятия из морозильной камеры.
4.4 Подготовка инокулюма
4.4.1 Общие положения
Стандартизация инокулюма является необходимой процедурой для обеспечения точности и вос
производимости процедуры определения чувствительности методом микроразведений в бульоне. В
связи с этим контроль чистоты и подсчет жизнеспособных колоний должны быть выполнены для каждо го
изолята, исследуемого данным методом.
4.4.2 Методы приготовления инокулюма в бульонной культуре
Инокулюм может быть подготовлен путем разбавления бульонной культуры или суспендирования
в бульоне нескольких морфологически сходных (если возможно) колоний культуры, выращенной в те
чение 12— 18 ч инкубации на неселективной агаровой среде, с помощью нанесения стерильной петлей
или тампоном. При суспендировании колоний следует отбирать морфологически сходные колонии, что
бы избежать контаминации другими видами или атипичными формами того же вида.
Используемый бульон не должен влиять на действие антимикробного препарата. Бульон инкуби
руют при температуре (35 ± 1) °С, пока рост не достигнет мутности, равной или превышающей 0,5 по
стандарту МакФарланда [4]. При необходимости культура может быть доведена до мутности, эквива
лентной 0,5 по стандарту МакФарланда, с помощью физиологического раствора или бульона.
Измере-
4