ГОСТ Р ИСО 20776-1—2022
Приложение А
(справочное)
Требования к бульону Мюллера—Хинтон
А.1 Общие положения
Добавки, помимо двухвалентных катионов или других дополнительных компонентов, не должны использо
ваться, если они не являются необходимыми для роста исследуемых организмов.
А.2 Исследование неприхотливых микроорганизмов в бульоне Мюллера—Хинтон
А.2.1 Общие положения
Стандартной средой для исследования неприхотливых микроорганизмов является бульон Мюллера—
Хинтон.
Формула его приготовления следующая [6]:
- мясной гидролизат из 300 г говядины;
- кислотный гидролизат казеина 17,5 г;
- крахмал 1,5 г;
- дистиллированная вода до 1000 мл;
- pH 7,2—7,4.
Практически весь используемый бульон Мюллера—Хинтон выпускается промышленным способом. Приго
товление бульона из порошка всех изготовителей аналогично и соответствует оригинальной рецептуре среды.
А.2.2 Регулирование количества и содержание катионов
Бульон должен содержать достаточную концентрацию катионов, чтобы обеспечить рост, позволяющий поль
зователю определить значение МПК для контрольных штаммов в пределах, указанных в [1] и [2].
Для новых партий бульона Мюллера—Хинтон может потребоваться определение приемлемого содержания
катионов. Это исследование может быть выполнено с помощью спектроскопии с индуктивно связанной плазмой
(ICP) или плазменной атомно-абсорбционной спектрометрии (FAAS) [7].
Для регулирования количества ионов кальция и магния готовят растворы, содержащие по 10 мг/л хлорида
кальция (3,68 г СаС12 •2Н20 в 100 мл деионизированной воды) и хлорида магния (8,36 g MgCI2 ■6Н20 в 100 мл
деионизированной воды), стерилизуют с помощью мембранного фильтра ихранят при температуре от 2 °Сдо 8 °С.
Каждые 0,1 мл объема раствора катионов с концентрацией 10 мг/л, добавленные к 1л бульона, повышают содер
жание катионов на 1 мг/л. Растворы солей добавляют, помешивая, при температуре от 2 °С до 8 °С.
В [8]. [9] указано, что для большинства комбинаций антимикробных препаратов и бактерий добавление
ионов кальция и магния до окончательной концентрации от 20 до 25 мг/л и от 10 до 12,5 мг/л, соответственно,
обеспечивало получение точных результатов контроля качества. В настоящем стандарте под «исследованием в
бульоне Мюллера—Хинтон» подразумевают исследование в бульоне Мюллера—Хинтон со сбалансированным
количеством катионов.
Случаи, в которых требуется дополнительная корректировка содержания катионов в бульоне Мюллера—
Хинтон для обеспечения воспроизводимости результатов определения чувствительности к антимикробным пре
паратам, приведены ниже.
А.2.3 Коррекция состава среды по сравнению с эталонной средой Мюллера—Хинтон для метода
микроразведений в бульоне при исследовании некоторых видов бактерий идругих микроорганизмов
А.2.3.1 Род Streptococcus
При исследовании стрептококков к бульону Мюллера—Хинтон должна быть добавлена лизированная (или
дефибринированная) лошадиная кровь до окончательной концентрации от 2,5 % до 5,0 %. Кровь должна быть
получена от надежного поставщика. Должно быть определено значение гематокрита (не менее 30 %). Для при
готовления лизированной крови в стерильных условиях смешивают равные объемы дефибринированной крови и
стерильной дистиллированной воды. Замораживают при температуре минус 20 °С и размораживают до оконча
тельного лизирования клеток (может потребоваться пять — семь циклов замораживания — оттаивания). Центри
фугируют для осветления раствора. Прозрачность раствора относится к значимым критериям для интерпретации
результатов. Недостаточный лизис или центрифугирование могут быть причиной того, что раствор не удается полу чить
прозрачным. Повторное центрифугирование может повысить прозрачность раствора. Полученный препарат
лизированной крови является базовым раствором с объемной концентрацией 50 % [10].
А.2.3.2 Сульфаниламиды и триметоприм
Среда должна иметь массовую концентрацию тимидина менее чем 0,03 мг/л. Такая среда не исключает воз
можность исследования других антимикробных препаратов [11].
8