ГОСТ 30711-2001
впитаться в фильтрующий слой. После этого проводят последовательное элюирование следующими
смесям»! растворителей порциями по 25 см3:
- толуол-уксусмая кислота (9,5:0,5);
- гексан;
- этиловый эфир-гексан-ацетонитрил (5:3:0,5).
Элюаты отбрасывают. Вколонку вносят 60 см3смеси хлороформ-ацетон (4:1), с этого момента
начинают отбирать выходящий элюат. После прекращения выхода элюата из колонки его по частям
упаривают в остродонной колбе на ротационном испарителе при температуре 35—40 *С досуха.
Остаток в отгонной колбе растворяют в 0.2 см3смеси бензол-ацетонитрил (97:3) и используют для
хроматографического анализа.
3.5.3 Качественное определение анатоксинов В1и М,
На пластинку «Силуфол* сверху иснизу наносят две тонкие карандашныелинии на расстоянии
1,5 см от краев. На нижней (стартовой) линии отмечают 3 точки па расстоянии 2 см друг от друга,
в которые наносят с помощью микрошприца по 0.002. 0,005 и 0,01 см’ рабочего раствора
смеси афлатоксннов В, и В,. При испытании молочных продуктов в эти же точки наносят
дополнительно по 0,002, 0.005 и 0,01 см3рабочего раствора афлатоксина М,. На расстоянии I
см между пятнами рабочих растворов наносят 0.01 и 0,02 см3исследуемого раствора. Пластинку
стартовой линией вниз помещают в хроматографическую камеру, предварительно заполненную
смесью этиловый эфир-ме-танол-вода (94:4.5:1,5) (при испытании молочных продуктов —
этиловый эфир-метанол-пода (90:8:2)). Развитие хроматограммы проводят до достижения
фронтом растворителя верхней каран дашной линии.
Пластинку извлекают из камеры, сушат на воздухе 5 мин и рассматривают в длинноволновом
ультрафиолетовом свете. На хроматограмме рабочего раствора смеси афлатоксннов последние
располагаются по напраазению движения фронта растворителя в следующем порядке: М,. В,, В,.
Обнаружение на хроматограммах экстракта пятен, соответствующих по хроматографической по
движности и цвету флюоресценции пятнам афлатоксннов В, и М, из рабочих растворов, свидетель
ствует о возможном наличии этих афлатоксннов в пищевом продукте. Обнаружение на
хроматограммах экстракта пятен, соответствующих по хроматографической подвижности и цвету
флюоресценции пятнам афлатоксина В,, свидетельствует о правильном извлечении афлатоксннов из
пробы.
Для подтверждения присутствия афлатоксннов В, и М, используют любой из следующих
тестов.
По первому тесту пластинку опрыскивают из распылителя раствором азотной кислоты в воде
(1:2) и рассматривают ее в ультрафиолетовом свете. Если цвет флюоресценции пятен на хромато
граммах афлатоксннов изменился с синего на желтый, а цвет флюоресценции соответствующих
пятен на хроматограммах экстракта не изменился, то афлатоксин в пробе отсутствует. Если же цвет
флюоресценции соответствующих пятен на хроматограммах экстракта также изменился на
желтый, то это служит подтверждением возможного наличия афлатоксннов в пробе.
По второму тесту на стеклянную пластинку 20x20 см наносят 2—4 см3 раствора йода в
этиловом эфире, распределяют его по всей поверхности и дают эфиру испариться. Над хроматогра
фической пластинкой на расстоянии 0,5—1,0 см помещают пластинку с тонким слоем йода и
подвергают ее воздействию паров йода в течение 1—2 мин. Затем пластинку рассматривают в
длинноволновом ультрафиолетовом свете. Сохранение цвета и интенсивности флюоресценции
пятен стандартов и соответствующих им пятен экстракта подтверждает возможное наличие афла-
токсииов в пробе продукта.
3.5.4 Количественное определение аНитоксинови М,
Пластинку «Силуфол* размечают тонкими карандашными линиями в соответствии с рисун
ком 1. В точку / микрошприцем наносят 0,020 см3 исследуемого раствора. В точку 2 наносят
0,005 см3, в точки J, ( и 5 соответственно 0,002, 0,004 и 0,006 см3 рабочего раствора
смеси афлатоксннов В, и В,. При испытании молочных продуктов дополнительно наносят
рабочий раствор афлатоксина М, в тех же количествах и в те же точки, что и рабочий
раствор смеси афлатоксннов В, и В,. Массу афлатоксннов В, и М, та, иг, нанесенную в
каждую точку, рассчитывают по формуле
mt = сПООО,(2)
где с — концентрация афлатоксина в рабочем растворе, мкг/см3;
V— объем рабочего раствора афлатоксина. нанесенный в точку на пластинке, см3.
7