ГОСТ 23454—2016
6 Условия проведения испытаний
При выполнении испытаний в лаборатории следует соблюдать следующие условия:
- температура окружающего воздуха................................................................................(20
±
5) °С;
- относительная влажность воздуха.......................................................................от 30 % до 80 %; -
атмосферное давление......................................... от 84 до 106 (от 630 до 795) кПа (мм рт. ст.).
7 Метод определения ингибирующих веществ с использованием
тест-культуры термофильного стрептококка и индикатора резазурина
7.1 Сущность метода
Метод основан на диагностике развития в молоке чувствительной тест-культуры Streptococcus
thermophilus В19 и восстановлении резазурина окислительно-восстановительными ферментами, вы
деляемыми в молоко микроорганизмами.
По изменению или не изменению окраски резазурина визуально оценивают отсутствие/наличие
ингибирующих веществ в молоке:
- при отсутствии в молоке ингибирующих веществ тест-культура Streptococcus thermophilus В19
развивается и окраска резазурина меняется с серо-сиреневой на сиреневую с розовым оттенком или
розовую, вплоть до белой;
- при наличии в молоке ингибирующих веществ тест-культура Streptococcus thermophilus В19 не
развивается либо ее развитие задерживается, а окраска резазурина остается серо-сиреневой или си
реневой.
Чувствительностьметодапозволяет обнаружитьвмолоке массовуюконцентрацию пенициллина—
0.004 мг/дм3, стрептомицина — 10 мг/дм3, тетрациклина — 1 мг/дм3, левомицетина — 5,0 мг/дм3; мас
совую долю активного хлора — 0.06 %. перекиси водорода — 0.005 %, надуксусной кислоты — 0.005 %,
сульфонола — 0,15 %. формалина — 0.004 %.
7.2 Подготовка к анализу
7.2.1 Приготовление стерильного обезжиренного молока
Обезжиренное молоко разливают по 100 см3 в колбы вместимостью не менее 200 см3 или по
10 см3в пробирки вместимостью не менее 20 см3и стерилизуют при температуре (121
±
1)°С в течение
(10
±
1) мин.
7.2.2 Приготовление основного раствора резазурина натриевой соли
Основной раствор резазурина натриевой соли массовой концентрации 0.0005 г/см3готовят сле
дующим образом.
0.100 г резазурина натриевой соли переносят в мерную колбу вместимостью 200 см3 и растворя
ют в небольшом количестве прокипяченной и охлажденной до температуры (25
±
2) °С дистиллирован
ной воды. Объем раствора доводят до метки прокипяченной и охлажденной до температуры (25
±
2) °С
дистиллированной водой. Смесь тщательно перемешивают.
Раствор резазурина натриевой соли хранят при температуре от 4 °С до 10 °С не более 30 сут.
7.2.3 Приготовление коллекционной тест-культуры
7.2.3.1 Для восстановления активности тест-культуры колбу со 100 см3обезжиренного стерилизо
ванного молока, подготовленного по 7.2.1, подогревают до температуры (43
±
1) °С. Порцию сухой бак
териальной закваски тест-культуры Streptococcus thermophilus В19 вносят в стерилизованное молоко и
тщательно перемешивают.
Культуру термостатируют при температуре (41
±
1) °С в течение 16—18 чдо образования плотного
сгустка, затем охлаждают до температуры (4
±
2) °С и используют для приготовления коллекционной
тест-культуры.
7.2.3.2 Для приготовления коллекционной тест-культуры в пробирку с 10 см3стерильного обезжи
ренного молока вносят одну петлю культуры, приготовленной по 7.2.3.1, и выдерживают в термостате
при температуре (41
±
1) °С в течение 16—18 ч.
Коллекционную культуру хранят при температуре (4
±
2) °С и пересевают через 10—14 сут. Через
3-4 пересадки ев снова готовят из сухой тест-культуры.
4