ГОСТ ISO 18416—2013
11.3 Валидация метода обнаружения
11.3.1 Метод
11.3.1.1 В пробирках, содержащих по 9 см3 разбавителя, готовят разведения калиброванной сус
пензии. чтобы в конечном счете получить концентрацию микроорганизмов, равную 100-500 КОЕ/см3. Для
подсчета окончательного количества жизнеспособных микроорганизмов в разведенной калиброванной су
спензии вносят 1см3 суспензии в чашку Петри и заливают 15-20 см3 расплавленной агариэованной среды.
Температура расплавленной среды поддерживается с помощью водяной бани на уровне не более 48 °С.
Дают среде в чашках застыть, а затем инкубируют при температуре (32.5 ± 2.5) °С в течение 20-24 ч.
11.3.1.2 Параллельно готовят две (цве повторности) исходные суспензии пробы в пробирке или
колбе, соблюдая выбранные для анализа условия (не менее 1 г или 1 см3 испытуемой продукции и
определенный объем бульона для обогащения). Если используют метод мембранной фильтрации, то
фильтруют в двух повторностях не менее 1 см3 испытуемой продукции и переносят каждый мембран
ный фильтр в пробирку или колбу, содержащую бульон для обогащения в условиях, выбранных для
проведения испытаний.
11.3.1.3 Стерильно вносят 0,1 см3разведенной калиброванной суспензии (11.3.1.1) тест-культуры
Candida albicans в одну пробирку или колбу (валидационный тест). Перемешивают, затем инкубиру ют
обе пробирки или колбы (валидационный тест и неконтаминированный контроль) при температуре
(32.5 ± 2.5) вС в течение 20-24 ч.
11.3.1.4 Проводят выделение из каждой пробирки или колбы (валидационный тест и неконта
минированный контроль). Используя стерильную петлю, делают высев методом истощающего штриха
на поверхность декстрозной агаризованмой среды Сабуро с хлорамфениколом. разлитой в чашки Пе
три (диаметр от 85 до 100 мм) в количестве приблизительно 15-20 см3. Инкубируют при температуре
(32.5 ± 2.5) еС в течение 20-24 ч.
11.3.2 Обработка результатов валидации
Проверяют, что разведенная калиброванная суспензия дрожжей содержит от 100 до 500 КОЕ/см3
микроорганизмов.
Нейтрализация и метод обнаружения являются достоверными, когда ростовые характеристики
Candida albicans наблюдаются у микроорганизмов, выросших на чашке с высевом из пробирки или
колбы с валидационным тестом (контаминированной калиброванной суспензией) и отсутствует рост на
чашке с высевом из пробирки или колбы с неконтаминированным контролем.
Когда обнаружен рост на чашке с высевом из пробирки или колбы с неконтаминированным кон
тролем (контаминированная продукция), нейтрализация и метод обнаружения являются достоверны
ми. если бактерии вида Candida albicans выделены на чашке Петри с высевом из пробирки или колбы с
валидационным тестом.
Отсутствие роста на чашках Петри с высевом из пробирки или колбы с валидационным тестом
указывает на то. что антимикробная активность все еще не нейтрализована и требуется изменение
условий метода путем увеличения объема питательного бульона, при этом количество продукции оста
ется тем же. или путем добавления большего количества инактивирующего вещества о бульон для
обогащения, или путем подбора условий, которые позволят выделить Candida albicans.
Если, несмотря на введение подходящих инактивирующих веществ и значительное увеличение
объема бульона, все еще невозможно выделить жизнеспособные культуры, как описано выше, это ука
зывает на малую вероятность контаминации продукции бактериями вида Candida albicans.
12 Протокол испытания
Протокол испытания должен содержать следующую информацию:
a) всю информацию, необходимую для полной идентификации продукции;
b
) используемый метод;
c) полученные результаты;
d) все детали приготовления исходной суспензии;
e) описание метода с указанием использованных нейтрализующих веществ и питательных сред;
f) валидацию метода, даже если испытание проводилось отдельно;
д) любые моменты, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как необязатель
ные. вместе с деталями, которые могут повлиять на полученные результаты.
7