9.4.2 Идентификация
9.4.2.1 Общие положения
Candida albicans могут быть диморфными и способны создавать псевдогифы. некоторые — ис
тинные гифы и грозди круглых бластоконидий, а также крупные толстостенные хламидослоры. При
низкой температуре окружающей среды данная культура может представлять эту псевдомицелиальную
форму, однако она может изменяться на одноклеточную форму при повышенных температурах.
Проводят дальнейшее изучение подозрительных колоний, изолированных на декстрозной а в и
зованной среде Сабуро с хлорамфениколом. Наличие Candida albicans может быть подтверждено и
другими подходящими культуральными и биохимическими тестами.
9.4.2.2 Окраска по Граму
Окраску проводят по ISO 21148
Под микроскопом клетки Candida albicans фиолетовые, короткие овальные или удлиненные, ино
гда почкуются.
9.4.2.3 Образование «ростковой трубки»
Помещают 0,5-1 см3 сыворотки (фетальная телячья или лошадиная сыворотка) в небольшую
пробирку.
Эмульгируют небольшую часть колонии дрожжей в сыворотке.
Инкубируют на водяной бане при температуре (37 ± 1) SC в течение 1.5-2 ч или в термостате при
температуре (37 ± 2) °С в течение 3 ч.
Помещают каплю сыворотки на предметное стекло, закрывают покровным стеклом и исследуют
под микроскопом образование «ростковой трубки».
«Ростковые трубки» появляются в виде цилиндрических волокон (нитей) из бластопор без каких-
либо сужений (перетяжек) в месте возникновения и без утолщений вдоль длины волокна.
Образование «ростковых трубок» является признаком присутствия Candida albicans.
Если «ростковые трубки» не были сформированы, колонии исследуют на образование псевдоги-
фов и хламидоспор согласно Э.4.2.4.
3.4.2.4 Культура на кукурузном агаре с 1%-ным полисорбатом 80
Петлей делают посев небольшой части дрожжевой колонии на поверхности среды через центр
чашки Петри. На штрих помещают стерильное покровное стекло.
Инкубируют при температуре (32.5 ± 2.5) °С до 3 дней.
Через 24 ч снимают крышку чашки Петри и изучают полученный рост через стекло под микроско
пом с увеличением от 100’ до 400\
Candida albicans образует крупную, сильно преломляющую, толстостенную хламидоспору. кото
рая может быть расположена терминально или на коротких боковых ветвях.
10 Обработка результатов (обнаружение Candida albicans)
Если при идентификации колоний подтверждено наличие данного вида, результат представляют
следующим образом: «бактерии вида Candida albicans обнаружены в навеске S пробы».
Если после обогащения роста не наблюдалось и/или если идентификация колоний не подтвер
дила наличие данного вида, результат представляют следующим образом: «бактерии вида Candida
albicans не обнаружены в навеске S пробы».
11 Нейтрализация антимикробных свойств продукции
11.1 Общие положения
Описанные требования подтверждают, что микроорганизм Candida albicans может расти в услови
ях проведения анализа.
11.2 Приготовление инокулята (посевного материала)
Перед проведением испытаний засевают поверхность среды, содержащей соевый и казеиновый
гидролизаты (SCDA) или декстроэный агар Сабуро (SDA), штаммом Candida albicans. Инкубируют чаш ки
при температуре (32.5 ± 2.5) вС в течение 18-24 ч.
Стерильной петлей штриховыми движениями снимают с поверхности среды выросшие колонии и ресу-
слендируютв разбавителедля приготовления калиброванной суспензии с концентрацией клеток 1-106 КОЕ/см3
(количество клеток можно измерить, используя спектрофотометр, см. ISO 21148 (приложение С)].
Калиброванную суспензию и ее разведения используют в течение 2 ч.
6