ГОСТ ISO 14502-2—2015
8.3.2
Л
истовой чай
(0.200 ♦0.001) г пробы, подготовленной в соответствии с разделом 7. помещают в центрифужную
пробирку для экстрагирования (см. 5.6).
8.4 Экстрагирование полифенолов
8.4.1 Растворимый чай
8.4.1.1 Добавляютв мерную колбус пробой (см. 8.3.1) примерно25 см3горячей воды (максималь
ная температура 60 °С). Перемешиваютдо полногорастворения пробы иохлаждаютдо комнатной тем
пературы.
8.4.1.2 Добавляют 5,0 см3 ацетонитрила (см. 4.2) в мерную колбу (см. 8.4.1.1). Добавляютводудо
метки и перемешивают.
8.4.2
Л
истовой чай
8.4.2.1 Дозатор (см. 5.3), содержащий водный раствор метанола (см. 4.5). помещают на водяную
баню (см. 5.2), нагретую до температуры 70 °С. и выдерживают не менее 30 мин.
8.4.2.2 Помещают пробиркуспробой(см. 8.3.2) на водяную баню, нагретуюдо температуры 70 °С.
Добавляют5.0см3водногораствораметанола(см. 8.4.2.1). закрываютпробкойиперемешиваютнашей
кере вортексного типа (см. 5.5).
8.4.2.3 Нагреваютпробиркуна водяной бане втечение 10мин. перемешиваясодержимое на шей
кере через 5 и 10 мин.
Для обеспечения полной экстракции необходимо тщательно перемешивать пробу.
8.42.4 Извлекают пробирку из водяной бани иохлаждаютдо комнатной температуры. Извлекают
пробку из пробирки, помещают пробирку в центрифугу (см. 5.4) и центрифугируют в течение 10 мин при
частоте вращения 3500 об/мин.
8.4.2.5 Аккуратно декантируют жидкость в градуированную пробирку (см. 5.7) или мерную колбу
вместимостью 10 см3с одной меткой (см. 5.8).
8.4.2.6 Повторяют экстракцию по 8 4.2.2—8.4.2.5. Объединяют две порции экстракта, доводят
объем до 10.0 см3хоподным водным раствором метанола (см. 4.5) и перемешивают.
8.4.2.7 Экстракт,приготовленныйпо8.4.2.6, хранятнеболее24чпри температуре4 еС. Перед про
ведением измерения экстрактдоводятдо комнатной температуры. При появлении в экстракте неболь
шого количества осадка его отделение не требуется.
8.5 Разбавление
С помощью пипетки помещают 1.0 см3экстракта растворимого чая (см. 8.4.1.2) или листового чая
(см. 8.4.2.6)в градуированную пробирку (см. 5.7). Разбавляютстабилизирующим раствором (см. 4.8)до
5.0 см3. Перемешивают и фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 мкм (см. 5.10).
8.6 Проведение измерения
8.6.1 Общие положения
Катехины сильно подвержены разрушению, основным фактором которого является загрязнение
хроматографической системы ионами металлов (см. приложение D). Несмотря на то, что добавление
ЭДТА кподвижнойфазеспособствует минимизации воздействия этогофактора, важносодержатьв чис
тоте хроматографическую систему. Рекомендуется осторожно промывать систему, например, ацето
нитрилом с объемной долей 50 % (рекомендуется предварительно промыть систему подходящей
смесью растворителей в зависимости от предшествующего использования) до и после использования
для удаления остатков буферных солей и кислот и предотвращения коррозии.
8.6.2 Настройка оборудования
Готовят хроматограф (см. 5.11)в соответствии синструкциями изготовителя иустанавливаютсле
дующие параметры хроматографического разделения:
a) скорость потока подвижной фазы (см. 4.9). 1.0 см3/мин;
b
) условия бинарного градиентного элюирования: 100 % подвижной фазы А (см. 4.9.1) в течение
10 мин. через 15 мин линейный градиент до состава 68 % подвижной фазы А и 32 % подвижной фазы В
(см. 4.9.2). элюирование таким составом в течение 10 мин. повторное элюирование 100 % подвижной
фазой А в течение 10 мин для достижения равновесия:
c) температура колонки (см. 5.13): (35,0
±
0.5) °С. Поддержание температурного режима колонки
обязательно (посредством термостата колонки или водяной рубашки), если нужно избежать значитель
ных отклонений времени удерживания;
6