ГОСТ 33539—2015
Каждое растение должно быть подвергнуто двукратному исследованию с использованием раз
личных методов. Для микрорастений первый анализ (DAS-ELISA) проводят в культуре in vitro, второй
анализ (биологический тест на индикаторных растениях) — после пересадки растений в теплицы, либо оба
анализа проводят после пересадки растений в теплицы. Для макрорастений оба анализа проводят в
теплицах.
Примечание — Растения с сероположительной реакцией в теплицу не высаживают.
8.1.2 Ввиду способности вируса Т картофеля передаваться с истинными семенами картофеля
необходимо обязательное исследование получаемых сеянцев. Полученные микрорастения использу ют
для проведения исследования методом DAS-ELISA, пересадки в теплицу и резервного хранения в
культуре in vitro.
После пересадки растений в теплицу в стадии бутонизации проводят их повторное исследование
методом биологического теста на индикаторных растениях или ПЦР.
Примечание — В качестве альтернативы культуре in vitro семена высевают в изолированном боксе
теплицы в стерильный субстрат. При достижении стадии двух — четырех листьев по 20 сеянцев каждого образца
пересаживают в индивидуальные горшки и встадии бутонизации исследуют методом DAS-ELISA, ПЦР и/или мето дом
биологического теста с индикаторными растениями на наличие вируса Т картофеля.
8.1.3 Для получения объективной оценки качества семенного материала и окончательной оценки
фитосанитарного состояния партий семян проводят послеуборочное лабораторное определение зара
женности клубней вирусом Т картофеля.
Исследование проводят в тех случаях, когда симптомы на листьях, зараженных вирусом Т карто
феля растений, не всегда проявляются в период вегетации, особенно в случае позднего заражения (в
конце вегетации).
Сразу после уборки метод DAS-ELISA позволяет достаточно эффективно выявлять вирус Т карто
феля в клубнях с вторичной инфекцией (надежнее — в базальной части клубня), менее достоверно — в
случае первичной инфекции. Эффективность выявления вируса в клубнях, находящихся в состоянии
покоя, значительно ниже. Это объясняется значительным снижением титра вируса, а также его не
равномерным распределением по клубню.
Идентификацию вируса Т картофеля проводят в пророщенных клубнях с ростками длиной от 1 до
2 см, т. к. проращивание активизирует размножение вируса, и при этом его концентрация возрастает до
уровня, выявляемого методом DAS-ELISA.
8.1.4 Наиболее достоверные результаты получают при исследовании растений, выращенных из
индексов — вырезанных с помощью скальпеля глазков клубня диаметром 2,5 см. Индексы помещают на
10— 15 мин в раствор гибберелловой кислоты по 7.1.1.1, после чего подсушивают в течение не ме нее
72 ч при температуре от 18 до 25 °С. При необходимости следует одновременно с замачиванием в
растворе гибберелловой кислоты обработать индексы фунгицидом системного действия для предот
вращения гибели ростков от ризоктониозной корневой гнили (Rhizoctonia solani J.G. Kuhn).
Индексы высаживают в субстрат (торф, опилки, песок или их смесь) так, чтобы глазок находился
сбоку. Сверху насыпают от 1 до 2 см субстрата таким образом, чтобы глазок имел с ним хороший кон такт.
Необходимо поддерживать высокую влажность субстрата в течение первых двух недель. Индексы
культивируют при температуре от 20 до 25 °С днем и температуре 18 °С ночью при 16-часовом свето вом
дне. При соблюдении данной технологии растения развиваются из индексов в течение четырех недель.
Для исследования используют растения с полностью развитыми листьями.
8.2 Визуальный метод выявления
8.2.1 Сущность метода
Сущность метода заключается в визуальном обследовании листьев растений в период вегетации
на наличие симптомов поражения вирусом Т картофеля (см. приложение Б).
8.2.2 Проведение обследования
8.2.2.1 На оздоровленном исходном материале (микрорастения, высаженные для получения ми
ни-клубней, первая полевая репродукция из мини-клубней, клоновый материал) проводят осмотр каж
дого растения. Объем выборки проб и образцов — по 7.2.3.1.
8.2.2.2 В посадках элиты и суперэлиты картофеля проводят визуальный осмотр листьев не менее
1000 растений на каждые 5 га посадок. Для этого осматривают на одном ряду 100 растений подряд
в 10 местах при пересечении поля по диагонали. Объем выборки проб и образцов — по 7.2.3.2.
11