ГОСТ 33539—2015
4.3 Серологические анализы проводят твердофазным ИФА в модификации DAS-ELISA.
4.4 В случае использования в качестве отборочных анализов серологических методов положи
тельный результат проверяют в подтверждающем молекулярном анализе со специфическими прайме
рами к вирусу Т картофеля. Образец считают зараженным вирусом Т картофеля при наличии положи
тельных результатов в обоих анализах.
4.5 В случае использования в качестве отборочных анализов молекулярных методов положитель
ный результат проверяют в подтверждающем серологическом анализе. Образец считают зараженным
вирусом Т картофеля при наличии положительных результатов в обоих анализах.
4.6 В качестве дополнительного подтверждающего анализа используют биологический тест на
индикаторных растениях по 8.5.
4.7 При необходимости установления морфологии вирионов, типичных для представителей се
мейства Flexiviridae, используют метод электронной микроскопии (см. рисунок А.1, приложение А).
4.8 При первичном обнаружении вируса Т картофеля рекомендуется провести секвенирование
гена белка оболочки для сравнения с сиквенсами изолятов вируса Т картофеля в базах данных генети
ческих последовательностей.
4.9 Исходный образец клубней и листьев растений с этикетками, образцы РНК и экстракты сока,
полученные из образцов растений, хранят в пробирках при температуре минус 80 °С не менее 12 мес;
продукты амплификации ПЦР — при температуре минус 20 °С не менее 12 мес.
5 Общие требования
5.1 Требования безопасности
При выполнении исследования необходимо соблюдать требования техники безопасности при ра
боте с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.
Исследования проводят в перчатках и лабораторных халатах. При работе с раствором бромисто
го этидия используют резиновые перчатки.
Помещение, в котором проводят исследования, должно быть оборудовано общей приточно-вы
тяжной вентиляцией по ГОСТ 12.4.021. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не долж но
превышать норм, установленных ГОСТ 12.1.005.
При работе с электроустановками электробезопасность должна соответствовать требованиям
ГОСТ 12.1.019. Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасно сти
по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. При работе с УФ-излучением
необходимо пользоваться защитным экраном и защитными очками.
Утилизацию зараженного растительного материала проводят автоклавированием в течение
20 мин при температуре от 121 до 125 °С.
5.2 Требования к лаборатории
Общие требования к лаборатории — по ГОСТ ИСО/МЭК 17025.
Для исключения ложноположительных результатов исследования и некорректной интерпретации
полученных результатов ПЦР-лаборатория должна включать следующий набор рабочих зон:
- приема и регистрации образцов;
- первичной обработки образцов;
- выделения ДНК/РНК;
- проведения ПЦР;
- детекции продуктов амплификации (отсутствует в том случае, если детекцию продуктов ПЦР
осуществляют по методике ПЦР в режиме реального времени).
5.3 Требования к персоналу
Персонал, участвующий в исследовании, должен владеть методами ИФА и ПЦР и быть обучен
технике обращения с лабораторным оборудованием.
6 Средства измерений, аппаратура, реактивы, посуда и материалы
6.1 Для отбора и хранения проб и образцов по 7.2 используют:
- весы по ГОСТ OIML R 76-1 высокого класса точности с пределом допускаемой абсолютной по
грешности однократного взвешивания не более ± 0,0001 г;
4