ГОСТ Р 57003—2016
Для блокирования эндогенной пероксидазы возможно использование свежеприготовленного
3%-ного раствора перекиси водорода в течение S-10 мин.
Образцы активно четырехкратно промывать в буферном растворе в течение 10 мин.
Затем нанести разведенные в соответствии с указаниями фирмы-производителя первичные анти
тела в объеме 50 мкл на одно мини-поле препарата. Инкубацию проводить при комнатной температуре
в течение 30-60 мин в герметичной влажной камере (во избежание высыхания реактива), если произ
водителем МКАТ не указано иное. Параллельно ставится один негативный и один позитивный «кон
троль». Затем препараты активно промывать по 5 мин в четырех сменах буферного раствора.
Систему визуализации необходимо применять согласно прилагаемой к ней инструкции.
Выявление пероксидазной активности проводить с использованием специальных реагентов (на
пример, с ДАВ Chromogen) или иного аналогичного реактива другого производителя. Трижды промыть
препараты в дистиллированной воде. Окрасить гематоксилином Майера в течение 20-30 с. Препараты
подсушить, покрыть покровным стеклом (пленкой), после чего они могут быть исследованы.
9.1.4Оценка ИЦХ реакции проводится на участках препарата с максимальным окрашиванием в
среднем на 200 опухолевых клетках, но не менее чем при 100 клетках в препарате.
Необходимо принимать во внимание, что:
- ядерная реакция проявляется интенсивным окрашиванием ядра;
- цитоллазменная реакция — диффузным окрашиванием цитоплазмы или отложением гранул в
виде грубых пятен и зерен1*;
- мембранная реакция — диффузным окрашиванием мембраны.
Реакцию считать:
- отрицательной — при полном отсутствии или экспрессии антигена менее чем в 5 % опухолевых
клеток;
- слабо положительной — при наличии реакции в 5-25 % клеток;
- положительной — более чем в 26 %;
- выраженной — более чем в 60 % клеток;
При оценке принимать во внимание интенсивность и полноту окрашивания клеток.
9.2 Методика иммуноцитохимического исследования при наличии
в лаборатории иммуностейнера
ИЦХ при наличии в лаборатории иммуностейнера выполнять по методике, предложенной произ
водителем данного оборудования для ИГХ. но с этапа «демаскировка», если использовалась транс
портная или консервирующая жидкость, содержащая формалин, или со следующего за «демаски
ровкой» этапа, если для сохранения материала формалин или формалинсодержащий консервант не
использовался.
9.3 Методика иммуногистохимического исследования
Проведение ИГХ исследования осуществляется в соответствии с инструкцией к оборудованию и
используемым реактивам.
Трактовка результатов исследования осуществляется непосредственно врачом, выполнявшим
морфологическую (цитологическую или гистологическую) диагностику, или с его участием.
Крайне важно учитывать, что основными остаются традиционные цитологическое и гистологиче
ское исследования и выбор того или иного алгоритма диагностики зависит от результата именно этого
исследования.
9.4 Молекулярно-генетические исследования
Под молекулярно-генетическими методами диагностики рака легкого подразумеваются методы
выявления качественных и/или количественных изменений на уровне ДНК и РНК с целью предоставле
ния лечащему врачу необходимой для лечения пациента информации.
1* Цитоплазменную реакцию дают белох S-ЮО. виментин. десмин. тиреоглобулин, кальцитонин, цитокера
тины. CD-45. PSA и НВМЕ-1. Отложение гранул в виде грубых пятен и зерен в цитоплазме более характерно для
хромогранина А. синаптофизина и НМВ-45. Мембранное окрашивание наблюдается при проведении реакции с
онкопротеином C-erb. В-2 и ЭМА.
9