ГОСТ 24849— 2014
Приложение Б
(обязательное)
Постановка оксидазного теста
Для подтверждения наличия в пробе воды колиформных бактерий выполняют оксидазный тест одним из
способов:
Способ 1
В качестве реактива для оксидазного теста используют тетраметип-л-фенипендиамин гидрохлорид.
Мембранныйфильтрсвыросшимина нем колониями(7.1.1.2)с пита тельнойсредыпереносят на кружокфиль
тровальнойбумаги большего диаметра, чем фильтр, обильносмоченный реактивом тетраметил-л-фенилендиамин
гидрохлоридом для определения оксидазной активности (А.5. приложение А). Оксидазный тест считают положи
тельным. если в течение 1—4 мин появляется окрашивание колоний в фиолетово-коричневый цвет. В случае не
обходимости дальнейшей идентификации оксидазоотрицательных бактерий по 7.1.1 настоящего стандарта пере
сев колоний на подтверждающие среды проводят непосредственно с мембранного фильтра, расположенного на
кружке фильтровальной бумаги с реактивом. Время пересева не ограничено.
Способ 2
В качестве реактива для оксидазного теста используют диметил-л-фенилендиамин дигидрохлорид с
а-нафтолом.
Допускается использовать готовые к употреблению диски СИБ-оксидаза. соблюдая сроки хранения.
Мембранный фильтр с выросшими на нем колониями (7.1.1.2) с питательной среды переносят на кружок
фильтровальной бумаги несколько большего диаметра, чем фильтр, обильно смоченный реактивом диметил-л-
фенилендиамин дигидрохлоридом для определения оксидазной активности (А.5. приложение А). Оксидазный тест
считают положительным, если появляется окрашивание колоний в синий цвет.
После появления первых признаков положительного теста (окрашивание колоний в синий цвет), но не позд
нее чем через 4 мин. мембранный фильтр переносят обратно на питательную среду. В случав необходимости
дальнейшей идентификации оксидазоотрицательных бактерий по 7.1.1.3 пересев колоний на
подтверждающие среды проводят непосредсгвенно с мембранного фильтра, расположенного на питательной
среде. Посев целе сообразно проводить не сразу после определения оксидазной активности, а после
выдерживания на питательной среде свыше 5 мин.
Способ 3
Полоску фильтровальной бумаги помещают в чистую чашку Петри и смачивают 2—3 каплями одного из ука
занных выше реактивов для оксидазного теста. Если используют бумажные индикаторные системы промышлен
ного производства, то их смачивают дистиллированной водой. С мембранных фильтров (7.1.1) отбирают по 3 — 4
изолированные колонии каждого типа из числа учтенных с использованием платиновой петли или стеклянной па
лочки (металлическая петля из нихрома дает пожноположительную реакцию при работе с реактивом тетраметил-
л-фенипендиамин гидрохлоридом) и наносят их штрихом на подготовленнуюфильтровальнуюбумагу. Оксидазный
тест считают положительным, если в течение 1мин появляется окрашивание в сине-фиолетовый цвет. Тест счита ют
отрицательным, если цвет в месте нанесения культуры не изменяется.
При получении нечеткого результата следует пересеять колонии секторами на питательный агар (А.1. при
ложение А) для получения роста изолированных колоний и через 24 ч инкубации посевов провести повторное
определение оксидазной активности.
22