ГОСТ 24849— 2014
Учитывают в качестве лактозоположительных все выросшие на мембранных фильтрах характер
ные колонии независимо от их размера:
- на среде Эндо — с темно-красной окраской и металлическим блеском или без него, слизистые с
красным центром и отпечатком на оборотной стороне фильтра;
- на среде с тергитолом 7 с желто-оранжевой, кирпично-красной окраской, иногда с ржаво-окра
шенным центром, образующим желтую окраску в среде под мембраной (ГОСТ 31955).
Для подтверждения принадлежности колоний к колиформным бактериям проводят оксидазный
тест одним из способов, указанных в приложении Б. с использованием реактива для оксидазного теста
(А.5. приложение А). При этом исследованию подлежат только те мембранные фильтры, на которых
выросло не более 30 — 50 изолированных характерных колоний.
При использовании способа 3 определения оксидазной активности проводят проверку всех (до
10) колоний или выборочно 3 — 4 колонии разной морфологии.
Если при выборочной проверке колоний каждого типа получают неодинаковые результаты, то чис
ло оксидазоотрицательных колоний рассчитывают по формуле (2), 7.1.1.4.
Выборочную проверку колоний не проводят, если оксидазный тест выполняют по способу 1 или
2. Оксидазную активность одновременно всех колоний на фильтре учитывают через 1 — 4 мин после
контакта с реактивом, что исключает субъективную оценку результатов исследования.
Подсчитывают сумму
(А)
всех колоний лактоэоположительных оксидазоотрицательных бактерий,
подтвержденных как колиформные бактерии.
Результаты подсчета регистрируют в журнале испытаний.
7.1.1.3 С целью повышения надежности оценки эпидемической безопасности воды при отсутствии
роста колиформных бактерий, но наличии роста лактозоотрицательных оксидазоотрицательных коло
ний разной морфологии — розовых, розовых с центром подтверждают принадлежность бактерий к се
мейству Enterobacteriaceae по ферментации глюкозы. Для этого на всех фильтрах подсчитывают число
указанных колоний каждого типа отдельно и регистрируют в журнале испытаний. Проводят посев двух
трех колоний каждого типа в бактериологические пробирки на полужидкую среду с индикатором ВР и
глюкозой (А.6. приложение А).
Пробирки с посевами помещают в термостат и инкубируют при температуре (36.0 ± 2.0) °С в те
чение 4 — 5 ч.
По истечении 4 — 5 ч инкубации посевов проводят учет реакции ферментации глюкозы:
- отсутствие в пробирках кислоты и газа подтверждает отсутствие бактерий, принадлежащих к
семейству Enterobacteriaceae;
- образование в пробирках кислоты и газа подтверждает принадлежность бактерий к семейству
Enterobacteriaceae.
Если при выборочной проверке реакции ферментации глюкозы, проведенной на колониях каж
дого типа, получены неодинаковые результаты, то число подтвержденных колоний рассчитывают по
формуле (2), 7.1.1.4.
Подсчитывают число колоний лактозоотрицательных, не обладающих оксидазной активностью
бактерий и ферментирующих глюкозу с образованием кислоты и газа, что подтверждает их принадлеж
ность к семейству Enterobacteriaceae.
В журнале испытаний регистрируют число бактерий, относящихся к семейству Enterobacteriaceae.
7.1.1.4 Обработка результатов
При отсутствии на мембранных фильтрах колоний микроорганизмов или наличии пленчатых, губ
чатых с неровными поверхностью и краями, плесневых и других нехарактерных для колиформных бак
терий колоний, а также при наличии оксидазной активности у всех колоний (изменение цвета исследу
емых колоний) делают вывод о том. что в анализируемой пробе воды колиформные бактерии, а также
бактерии семейства Enterobacteriaceae и Е. coli отсутствуют.
При регистрации по 7.1.1.2 отсутствия оксидазной активности у лактозоположительных бактерий
делают вывод о том. что в пробе анализируемой воды колиформные бактерии присутствуют.
Для получения количественной оценки результата анализа рассчитывают число колоний коли
формных бактерий в 100 см3 пробы воды X по формуле