ГОСТ 24849—2014
А.6 Приготовление полужидкой среды с индикатором ВР и глюкозой
Полужидкую среду с глюкозой по ГОСТ 975 готовят из сухого препарата в соответствии с инструкцией
производителя.
Приготовленнуюсреду разливают в небольшие бактериологические пробирки, закрывают силиконовыми или
ватными пробками, обернутыми фольгой, и стерилизуют при температуре 112 °С в течение 10— 12 мин.
Срок хранения приготовленной полужидкой среды при температуре 22 °С—25 °С — не более 20 сут.
А.7 Приготовление полужидкой среды с индикатором ВР, лактозой и триптофаном
Полужидкую среду с лактозой готовят из сухого препарата в соответствии с инструкцией производителя.
При приготовлении полужидкой среды с индикатором ВР с лактозой и триптофаном для определения бак
терий Е. coli в готовую среду перед разливом ее в бактериологические пробирки добавляют 0.05 г триптофана на
100 см3 среды.
Пробирки с приготовленной средой закрывают силиконовыми пробками и стерилизуют при температуре
112 °С в течение 10—12 мин.
Срок хранения приготовленной полужидкой среды при температуре 22 °С—25 °С не болев 20 сут.
А.8 Приготовление реактивных полосок для определения образования индола
Из фильтровальной бумаги нарезают полоски такого размера, чтобы полоска подходила для размещения
под пробку бактериологической пробирки с готовой полужидкой средой с лактозой и триптофаном (см. А.7) и не
касалась поверхности среды.
Готовят реактив следующим образом: встерильную стеклянную колбу вместимостью 100 см3 вносят 50 см3
96 %-ного этилового спирта, добавляют до растворения 4 г лара-диметилзминобензапьдегида. затем прибавляют
50 см3 ортофосфорной кислоты (очищенной концентрированной).
Нарезанные полоски из фильтровальной бумаги на 1/3 их длины опускают в колбу с реактивом и выдержи
вают не более 1 мин для полного смачивания реактивом указанного участка полоски. Затем полоски высушива
ют и упаковывают в стерильные емкости из темного стекла с притертой пробкой или плотные пакеты из черной
бумаги.
Срок хранения высушенных реактивных полосок в темном месте — не более 40 сут.
Цвет обработанного участка поверхности готовой к применению реактивной полоски должен быть желтым.
П р и м е ч а н и е — Чувствительность реактивных полосок увеличится, если этиловый спирт заменить на
амиловый или изоамиловый.
А.9 Приготовление хромокульт колиформ агара для ускоренного одновременного определения Е.
coli и колиформных бактерий в одном посеве
Хромокульт колиформ агар (далее — агар) готовят из сухого препарата в соответствии с инструкцией
производителя.
Навеску агара помещают в стехляную или эмалированную емкость с дистиллированной водой и нагревают
на кипящей водяной бане, периодически помешивая, до полного растворения препарата в течение 35 мин. Не до
пускается автоклавировать и перегревать.
Готовую среду охлаждают до 45 °С—50 °С и разливают в чашки Петри.
Срок хранения питательной среды при температуре 2 °С—8 *С в защищенном от света месте — не более
21 сут.
Для предотвращения от высыхания чашки со средой рекомендуется поместить в пластиковые мешки.
Готовая среда должна быть желтоватого цвета.
А.10 Приготовление сред для ускоренного определения Е. coli
А.10.1 Приготовление триптон-желчного агара (ТЖА)
Приготовление среды ТЖА проводят по ГОСТ 31955 (В.1. приложение В) или из готового препарата в соот
ветствиис инструкцией производителя. Приготовленную средуохлаждают до температуры (50 ± 5) °С и разливают в
чашки Петри. Срок хранения — не более 10 сут в защищенном от света месте при температуре (5 ± 3) °С.
А.10.2 Приготовление неселективного триптон-соевого агара(ТСА)
Приготовление среды ТСА проводят по ГОСТ 31955 (В.1. приложение В) или из готового препарата в соот
ветствиис инструкцией производителя. Приготовленную средуохлаждают до температуры (50 ± 5) °С и разливают в
чашки Петри. Срок хранения — не более 10 сут в защищенном от света месте при температуре (5 ± 3) °С.
А.11 Приготовление реактива Ковача для индольного теста для ускоренного определения Е. coli
Реактив готовят в стационарной лаборатории по ГОСТ 31955.
Состав:
лара-диметиламинобензальдегид — 0.5 г.
соляная кислота молярной концентрации 1моль/дм3— 100 см3.
Реактив готовят путем растворения лара-диметиламинобензальдегида всоляной кислоте.
19