ГОСТ Р 56144—2014
Т а б л и ц а 5 — Ожидаемый результат амплификации положительных и отрицательных контролен ПЦР
Наличие специфической полосы на электрофореграммс, соответствующей
Контроль
ВКО
Ф р а гм е н т у
F-гена
вируса НБ
фрагменту М-гема
вируса НБ
фрагменту
S-гена вируса
ИБК
фрагменту УР2-гема
вируса ИББ
Экстракции♦
РНК. Ка
-
-
-
-
ПЦР. К--
-
-
-
-
ПЦР. К++
+
+
+
♦
П р и м е ч а н и е — Знак «+» означает, что обнаружен ПЦР-продукт, знак «-» — не обнаружен.
В дорожках К+ и Квс ВКО должна быть яркая светящаяся полоса соответствующего размера.
В дорожках К«- с ПКО вирусов НБ. ИББ и ИБК должны наблюдаться специфические полосы
амплифицированной ДНК соответствующей длины по 12.1.
В дорожках К- и Кя. кроме Кв с ВКО. не должно быть никаких полос, за исключением возможных
димеров праймеров, находящихся ниже уровня 100 л. н.
12.3 Если результаты анализа положительных и отрицательных контролей не соответствуют
приведенным в таблице 5. испытание повторяют со следующих этапов:
• если в дорожках отрицательных контролей Кв и’или К- выявляется специфическая полоса,
значит, произошла контаминация реактивов или проб. Принимают меры по выявлению источника
контаминации. Повторяют испытание в соответствии с разделом 7;
• если в пробах с ВКО не выявляется соответствующая специфическая полоса, необходимо
повторить испытание в соответствии с разделом 7;
• если в дорожках К+ не выявляются специфические полосы, повторяют испытание с этапа ПЦР
по 10.7;
- если в дорожках электрофореграммы наблюдаются неспецифичоские полосы на разных
уровнях, то испытание повторяют с этапа ПЦР по 10.7. Возможные причины неспецифической
амплификации — отсутствие «горячего старта» или неверный температурный режим в ячейках
амплификатора.
12.4 Если результаты амплификации контролей не противоречат ожидаемому результату в
соответствии стаблицей 5.учитывают результатыамплификации анализируемых проб.
Интерпретацию результатов ПЦР-амплификации проводят в соответствии с таблицей 6.
Т а б л и ц а 6 — Интерпретация результатов ПЦР-амплификации анализируемых проб
Результат ПЦР-анализа
Специфическая полоса иа злектрофореграмме. соответствующая
фрагменту
F-
гема вируса
НБ
фрагменту
М-гена вируса
НБ
фрагменту
S-геиа вируса
ИБК
фрагменту
УЯ2-геиа вируса
ИББ
Выявлена кДНК вируса НБ
+
+
-
-
Выявлена »ДНКвируса ИБК
-
-
+
-
Выявлена кДНК вируса ИББ
-
-
-
+
Выявлена кДНК вирусов НБ. ИББ. ИБК
+
+
+
+
Выявлена »ДНКвирусов НБ. ИБК
+
+
+
-
Выявлена кДНК вирусов ИБК. ИББ
-
-
+
+
Выявлена кДНК вирусов НБ. ИББ
+
+
-
+
кДНК вирусов не выявлена
-
-
-
-
П р и м е ч а н и е — Знак «+» означает, что обнаружен ПЦР-продукт, знак «—» — не обнаружен.
14