ГОСТ Р 56144—2014
ц) концентрат буфера для капиллярного электрофореза’;
ч) воду дистиллированную по ГОСТ 6709.
5.4 Для проведения испытаний применяют следующую посуду и материалы:
-пробиркиодноразовыеполипропиленовыеплотнозакрывающиесяградуированные
вместимостью 0.6 и 1.5 см3;
- пробирки для ПЦР с плоской крышкой вместимостью 0.2 см3;
• колбу коническую по ГОСТ 25336, из термостойкого стекла вместимостью 250 см3;
- цилиндры мерные вместимостью 50 и 1000 см3по ГОСТ 1770;
- стаканы стеклянные вместимостью 100 и 400 см3по ГОСТ 25336;
• наконечники одноразовые универсальные для электронных или механических дозаторов с
варьируемыми объемами доз;
- штативы для микропробирок и наконечников;
- планшеты 96-луночные для автоматического генетического анализатора с уплотнителем,
основанием (штативом) и фиксатором”;
- емкости для сброса наконечников;
- емкости для растворов с уплотнителями ” ;
- емкость для анодного буфера4;
■салфетки для очистки линз, химически чистые;
- ленту лабораторную влагостойкую эластичную;
- халаты по ГОСТ 12.4.131 и ГОСТ 12.4.132;
- перчатки по ГОСТ Р 52239, одноразовые из латекса без пудры:
• бумагу фильтровальную по ГОСТ 12026;
- средства для обработки рабочего места по (1) и (2).
5.5Допускаетсяиспользованиедругихсредствизмеренийсметрологическими
характеристиками, а также оборудования, материалов, посуды и реактивов с техническими
характеристиками не хуже указанных.
6 Сущность метода
6.1 Сущность метода заключается в определении нуклеотидных последовательностей
вариабельных участков геномов штаммов вирусов НБ. ИББ и ИБК из испытуемых вакцин, их
сравнении с известными последовательностями и идентификации вакцинных штаммов.
6.2 Испытание состоит из следующих этапов:
• экстракция и очистка РНК вируса;
- реакция обратной транскрипции (ОТ) очищенной РНК вируса:
- амплификацияфрагментовгеномавирусовметодомПЦРс парами праймеров,
фланкирующими определенные участки генома для идентификации штамма вируса: НБ —
фрагменты генов М и F, ИББ — фрагмент гена VP2. ИБК — фрагмент гена S;
• детекция ПЦР-продуктов методом электрофореза в агарозном геле для выявления
специфических полос амплифицированной ДНК и оценки концентрации ПЦР-продуктов;
• секвенирование ПЦР-продуктов. очищенных от невключившихся праймеров и дНТФ,
дидезоксинуклеотидным методом с флуоресцентными красителями;
Примером подходящего концентрата буфера гложет служить «310 and 31хх Running Buffer. 10Х» (Applied
Biosystems. США). Данная информация является рекомендуемой и приведена для удобства пользователей
настоящего стандарта.
Примером может служить планшет «MicroAmp® Optical 96-Well Reaction Plate» (Applied Biosystems. США)
с уплотнителем типа «96-Well Rate Septa» (Applied Biosystems, США), основанием типа «3130 and 3100 series
Plate Base 96-Well» (Applied Biosystems. США) и фиксатором типа «3130 and 3100 series Plate Retainer 96-Well»
(Applied Biosystems. США). Данная информация является рекомендуемой и приведена для удобства
пользователей настоящего стандарта
Примерами могут служить емкости для растворов «Buffer, Water. Waste Reservoir», уплотнитель
«Reservoir Septa» (Applied Biosystems. США). Данная информация является рекомендуемой и приведена для
удобства пользователей настоящего стандарта.
* Примером может служить емкость для анодного буфера «3130/3130x1 Buffer Jar» (Applied Biosystems.
США). Данная информация является рекомендуемой и приведена для удобства пользователей настоящего
стандарта.
8