ГОСТ Р 56144—2014
- определение нуклеотидной последовательности фрагментов геномов штаммов вирусов путем
разделения продуктов реакции секвенирования, очищенных от избытка дНТФ. флуоресцентно-
меченных ддНТФ, праймера и солей, методом каппилярного электрофореза с детекцией сигнала
флюоресценции и контроль качества секвенирования;
• сравнение полученной нуклеотидной последовательности фрагмента генома вируса из
анализируемой пробы с известными последовательностями вирусных штаммов из баз данных в
целях идентификации вакцинного штамма и интерпретация результатов испытания.
7 Отбор и подготовка проб
7.1 Отбор лабораторной пробы
7.1.1 Лабораторную пробу от серии вакцины отбирают методом случайного отбора после
проверки качества упаковки, маркировки и внешнего вида в соответствии с ГОСТ 31929.
Лабораторная проба должна быть репрезентативной и содержать не менее двух упаковочных единиц
из каждой серии вакцины.
7.1.2 При получении неудовлетворительных результатов испытаний проводят повторный отбор
лабораторной пробы от удвоенного количества единиц упаковки той же серии в соответствии с ГОСТ
31929.
7.1.3 Лабораторные пробы хранят в соответствии с условиями, указанными производителем в
нормативных документах на конкретную вакцину.
7.2 Подготовка анализируемой пробы
7.2.1 Каждую анализируемую пробу подготавливают в одноразовых перчатках.
7.2.2 Из одной упаково^ой единицы отбирают 10 мм3жидкой вакцины и переносят в одноразовую
полипропиленовую микропробирку вместимостью 1.5 см3.
7.2.3 Лиофилизированные формы вакцин предварительно ресуспензируют в стерильном
растворителе и готовят анализируемую пробу по 7.2.2.
8 Экстракция и очистка РНК
8.1 Экстракцию и очистку РНК из анализируемой пробы вакцины проводят с использованием
комплекта реагентов для выделения РНК по 5.3 сорбционным методом.
8.2 Готовят необходимое количество одноразовых пробирок (по числу анализируемых проб) и
добавляют пробирку для отрицательного контроля К0. Вносят в каждую пробирку по 0.45 см3
«лизирующего раствора» и по 5 мм3ВКО. Пробирки маркируют.
8.3 В пробирки по 8.2 вносят по 10 мм3 анализируемых проб, используя наконечники с
аэрозольным барьером. В пробирку Кв вносят 10 мм3ОКО.
8.4 В каждую пробирку по 8.3 вносят 25 мм3 сорбента, который предварительно встряхивают.
Содержимое пробирок перемешивают и инкубируют при комнатной температуре в течение 8 — 10
мин, встряхивая через каждые 2 — 3 мин. Затем осаждают сорбент в микроцентрифуге с угловым
ротором при 5000 об./мин в течение 30 с. Надосадочную жидкость удаляют, используя вакуумный
отсасыватель с колбой-ловушкой и отдельный наконечник для каждой анализируемой пробы.
8.5 К полученному после центрифугирования сорбенту по 8.4 добавляют по 0.4 см3 «раствора
для отмывки N9 1». Перемешивают на встряхиватело до полного ресуспензирования сорбента.
Сорбент осаждают центрифугированием при 5000 об./мин на микроцентрифуге в течение 30 с.
Удаляют надосадочную жидкость, используя вакуумный отсасыватель с колбой-ловушкой и
отдельный наконечник для каждой анализируемой пробы.
8.6 Дважды повторяют процедуру отмывки, используя по 0.5
cmj
«раствора для отмывки N? 3»,
аналогично 8.5.
8.7 Затем процедуру отмывки повторяют, используя по 0.4 см3 «раствора для отмывки N» 4»,
аналогично 8.5. при этом сорбент осаждают центрифугированием при 10000 об./мин.
8.9 Пробирки с отмытым сорбентом по 8.7 помещают для его подсушивания в термостат при
температуре 60 °С на 12 — 15 мин. При этом крышки пробирок должны быть открыты.
8.10 В пробирки с подсушенным отмытым сорбентом добавляют по 50 мм3 буфера для элюции
РНК. кратковременно перемешивают на встряхивателе. помещают в термостат при температуре
9