ГОСТ 32306-2013
или убитые нагреванием высушенные микобактерии бычьего вида, суспензированные в сте
рильном жидком парафине.
или живые микобактерии бычьего вида патогенного штамма, суспензированные в физиологи
ческом растворе;
- морских свинок альбиносов или с белыми боками клинически здоровых массой не менее 250
г и не менее 400 г;
- колбу Кьельдаля вместимостью 50 и 100 см3 по ГОСТ 25336;
- аппарат перегонный Кьельдаля или автоматический аппарат для определения азота по
Кьельдалю.
- пипетки вместимостью 1, 2. 5 и 10 см3 по ГОСТ 29230;
- бюретки по ГОСТ 29251;
- колбы конические вместимостью 250 и 1000 см3 по ГОСТ 25336;
- капельницу по ГОСТ 25336;
- пробирки стеклянные по ГОСТ 25336;
- цилиндры вместимостью 100. 250 и 500 см3 по ГОСТ 1770;
- ареометры по ГОСТ 18481;
- колбы мерные с притертой пробкой вместимостью 100 и 1000 см3 по ГОСТ 1770;
- шприцы вместимостью 1 см3 по ГОСТ 22967 или ГОСТ 24861;
- иглы инъекционные по ГОСТ 25046,
- бумагу индикаторную по ГОСТ 4919.1;
- фильтры бумажные обезволенные;
- бумагу фильтровальную по ГОСТ 12026.
Допускается применение других средств измерений, аппаратуры, не уступающих вышеуказан
ным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность
измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.
8.2 Определение внешнего вида
Для определения внешнего вида каждый флакон (ампулу) с туберкулином просматривают ви
зуально в прямом свете, а флакон (ампулу) с туберкулином в жидкой форме и в проходящем свете.
8.3 Определение наличия вакуума в ампулах
Наличие вакуума в ампулах определяют согласно ГОСТ 28083.
8.4 Определение растворимости и однородности раствора
Три флакона (ампулы) с туберкулином в лиофилизированной форме растворяют растворите
лем микобактериальных аллергенов до активности 10000 МЕ/см3 [туберкулин (ППД) для млекопи
тающих] и 25000 МЕ/см3[туберкулин (ППД) для птиц].
Содержимое флаконов (ампул) встряхивают и просматривают в проходящем свете.
8.5 Определение концентрации водородных ионов
Определение концентрации водородных ионов (pH) туберкулина проводят потенциометриче
ским методом с помощью рН-метра. pH-метр используют в соответствии с инструкцией производителя.
Туберкулин влиофилизированной форме предварительно растворяют в соответствии с 8.4.
8.6 Определение количества белка
Количество белка в туберкулине определяют методом Кьельдаля или фотоэлектроколори-
метрическим методом. Испытания проводят не менее чем в трех повторностях.
Туберкулин влиофилизированной форме предварительно растворяют по 8.4.
8.6.1 Определение белка по белковому азоту методом Кьельдаля
8.6.1.1 Проведение испытания
В пробирку пипеткой вносят от 1 до 5 см3 пробы туберкулина, добавляют равный объем 20%-
ного раствора ТХУ и помещают в холодильник не менее чем на 4 ч при температуре от 4 °С до 6 °С.
Коагулированный белок фильтруют через обеззоленный фильтр, смывая остатки белка из пробирки 5
%-ным раствором ТХУ. Белок на фильтре трижды промывают 5 %-ным раствором ТХУ для удаления
остаточного азота. Фильтр с коагулированным белком слегка просушивают на воздухе, помещают
в колбу Кьельдаля. добавляют 2 - 5 см3 концентрированной серной кислоты (плотность 1,84 r/смЗ)
и минерализуют при температуре от 300 °С до 400 °С. Минерализацию проводят в присутствии
катали затора - перекиси водорода, которую добавляют по 0.5 см3 через каждые 1,5 - 2,0 ч до
полного обесцвечивания раствора. По окончании минерализации колбу с пробой охлаждают при
комнатной температуре, содержимое колбы переносят в колбу для отгона, остатки раствора смывают
порциями дистиллированной воды общим объемом не менее 20 см3. Полноту переноса проверяют
по индика тору метиловому оранжевому. Последняя порция смывных вод должна остаться желтой.
В коническую колбу наливают 1 0 - 2 0 см3 раствора серной кислоты молярной концентрации
0,05 моль/смЗ и 10 - 15 капель индикатора Таширо. Индикатор Таширо готовят смешиванием в рав
ных объемах 0.2%-ного спиртового раствора метилового красного и 0.1%-ного спиртового раствора
метиленового синего.
7