ГОСТ 32306-2013
8.14.1 Проведение испытания
Группе из трех морских свинок массой не менее 400 г. не использованных ранее в опытах,
удаляют с боков волосяной покров, дезинфицируют кожу 70%-ным раствором этилового спирта и
трехкратно с интервалом 5 сут вводят внутрикожно по 500 ME испытуемой пробы туберкулина в 0,1
см1растворителя. Через 15 - 21 сут после третьей инъекции подопытным животным и группе из трех
контрольных морских свинок с той же массой тела, ранее не вакцинированных, вводят
внутрикожно по 500 ME испытуемой пробы туберкулина в 0.1 см1растворителя.
8.14.2 Учет результатов
Реакцию учитывают через 24 - 48 ч после последней инъекции туберкулина. Реакции в двух
группах морских свинок не должны визуально отличаться.
8.15 Определение активности
Активность испытуемой пробы туберкулина устанавливают в международных единицах (ME)
сравнением с активностью стандарта туберкулина очищенного (ППД) (эталонного образца) на
морских свинках, сенсибилизированных микобактериями соответствующего вида М. bovis или М.
avium. Каждая организация-производитель должна использовать свой стандарт туберкулина
очищенного (ППД) (эталонный образец) [3J.
8.15.1 Определение активности туберкулина очищенного (ППД) для млекопитающих
8.15.1.1 Подготовка к испытанию
За четыре - шесть недель до проведения испытаний сенсибилизируют морских свинок массой
не менее 400 г. Сенсибилизированные свинки могут быть использованы в течение 6 мес с
интервалом не менее 30 сут между исследованиями.
Для сенсибилизации десяти морским свинкам внутрикожно вводят по 0,2 мг вакцины BCG в
0,1 см* стерильного физиологического раствора или внутримышечно вводят 1 - 2 мг убитых
нагреванием, высушенных микобактерий бычьего вида, суспензированных в стерильном жидком
парафине, или внутрибрюшинно (внутримышечно) вводят суспензию, содержащую 0,0001 мг (сырой
массы) живых микобактерий бычьего вида патогенного штамма в 0.5 см3 стерильного
физиологического раствора.
Из смеси содержимого пяти флаконов (ампул) с туберкулином испытуемой серии с
использованием стерильного физиологического раствора готовят три разведения: 1 : 1000; 1 : 200; 1 ;
40. что должно соответствовать 1.0; 5.0 и 25,0 ME в 0.1 см3. Туберкулин в лиофилизированной форме
предварительно растворяют в растворителе микобактериальных аллергенов до активности 10000
МЕ/см3по 8.4.
Дляприготовленияразведенийстандартатуберкулинаочищенного(ППД)для
млекопитающих (эталонного образца) используют три ампулы. К содержимому ампулы добавляют 1
см3 0,3%-ного раствора фенола в дистиллированной воде, получая при этом раствор туберкулина с
активностью, указанной в паспорте стандарта (эталонного образца). Содержимое трех ампул
стандарта (эталонного образца) смешивают и с использованием стерильного физиологического
раствора готовят разведения, соответствующие активности 1,0; 5.0 и 25,0 ME в 0.1 см3.
8.15.1.2 Проведение испытания
У морских свинок удаляют волосяной покров на боках, дезинфицируют места инъекций 70 %-
ным раствором этилового спирта и в условные точки (по методу латинского квадрата) вводят
внутрикожно отдельными шприцами по 0.1 см3каждого разведения испытуемой пробы туберкулина и
стандарта (эталонного образца). Морских свинок метят несмываемой краской.
8.15.1.3 Учет результатов
Реакцию у морских свинок учитывают через 24 - 28 ч путем измерения продольного и
поперечного диаметров ответных реакций, образующихся в месте введения туберкулина, и
вычисления среднего диаметра каждой ответной реакции.
Для расчета активности используют результаты только у тех свинок, которые к моменту учета
имеют диаметр ответных реакций не менее 8 мм и не более 25 мм и реагируют на все разведения
туберкулина испытуемой серии и стандарта туберкулина очищенного (ППД) для млекопитающих
(эталонного образца). Количество таких свинок должно быть не менее восьми.
Относительную активность R туберкулина испытуемой серии вычисляют, исходя из того, что
между выраженностью ответной реакции и логарифмом дозы введения аллергена существует
линейная зависимость [2].
Для вычисления логарифма относительной активности туберкулина IgR применяют формулу
(dIK-cl„)
11