ГОСТ 32306-2013
Содержимое колбы нейтрализуют 30 % - 33 %-ным раствором гидроокиси натрия, который
добавляют из расчета примерно 6 см3 на 1 см3 серной концентрированной кислоты, взятой для ми
нерализации. Отгонную колбу подсоединяют к холодильнику и парообразователю. Затем содержимое
колбы отгоняют. Отгон аммиака проводят до тех пор. пока в приемной колбе соберется не менее 20 см3
раствора. Окончание отгона проверяют по индикаторной бумаге.
Содержимое приемной колбы титруют раствором гидроокиси натрия молярной концентрации
0,1 моль/смЗ до перехода окраски раствора от лиловой к зеленой (индикатор реактив Таширо).
Параллельно определяют содержание азота в обеззоленном фильтре (аналогично определе
нию в испытуемой пробе).
8.6.1.2 Обработка результатов
Количество белка X. мг/смЗ. вычисляют по формуле
1
1
(^ 1 1 .5 0 *1 1 ,8 0 “ ^MC^NaOlt ) “ (^ H 2SO. ^IK SO . “ ^сф ^ NaOll ) . . ,
Л —
------------------------ -----------------------------------------------------------------------------------------------------------( )
П
И
Л
И
У
( K t - K J -K
NaOH
•1,4-6,25,
(
2
)
0.1 моль/дм3, израсхо-
0.1 моль/дм3. израс-
где2 4 - объем раствора серной кислоты молярной концентрации0,05
моль/дм3, см3;
\/кф - объем раствора гидроокиси натрия молярной концентрации
доваиный на титрование обеззоленного фильтра (контроль), см3:
Vnc - объем раствора гидроокиси натрия молярной концентрации
ходованный на титрование испытуемой пробы, см3;
HjSO* - поправочный коэффициент к титру раствора серной кислоты молярной концентра
ции 0,05 моль/дм3;
KNaOH - поправочный коэффициент к титру раствора гидроокиси натрия молярной концен
трации 0,1 моль/дм3;
1.4- коэффициент пересчета на азот (1 см3раствора серной кислоты молярной концентрации
0,05 моль/дм3эквивалентен 1,4 мг азота);
6,25 - коэффициент пересчета на белок (молекула белка содержит примерно 16 % азота);
п - объем пробы, взятой для испытания, см3.
8.6.2 Определение содержания белка методом фотоэлектроколориметрии
8.6.2.1 Подготовка к испытанию
Определение концентрации белка проводят по градуировочной кривой. Для построения гра
дуировочной кривой готовят в пробирках разведения туберкулина с известной концентрацией белка от
0,01 до 0,20 мг/см3 с шагом разведения 0.01 мг/см3 с использованием дистиллированной воды. К
полученным разведениям добавляют равный объем 20%-ного раствора ТХУ и перемешивают. Взвесь
коагулированного белка из каздой пробирки переносят в кювету и определяют оптическую плотность на
фотоэлектроколориметре при длине волны (540 ± 20) нм (зеленый светофильтр). В качестве кон
трольного раствора используют дистиллированную воду с добавлением равного объема 20 %-ного
раствора ТХУ. Измерение оптической плотности проводят через 2 - 3 мин после добавления ТХУ. По
полученным данным строят градуировочную кривую, откладывая по горизонтальной оси концентра цию
белка, а по вертикальной - соответствующее значение оптической плотности.
8.6.2.2 Проведение испытания
Готовят разведения испытуемой пробы с примерным содержанием белка 0.02 - 0,20 мг/см3.
Добавляют равный объем 20%-ного раствора ТХУ. через 2 - 3 мин взвесь коагулированного белка
переносят в кювету и определяют оптическую плотность. Используя градуировочную кривую, опреде
ляют концентрацию белка в разведенной пробе. С учетом разведения испытуемой пробы вычисляют
содержание белка.
8