ГОСТ ISO 29981—2013
b) Берут навеску разбавителя массой (90 i 0,1) г в каждую из предварительно стерилизованных
склянок (6.7) вместимостью 250 см3. Склянки закрывают.
c) Тщательно перемешивают содержимое закрытой упаковки пробы многократным встряхивани
ем и переворачиванием (предпочтительно 10 раз. движением амплитудой 300 мм в течение 7 с), или
тщательно перемешивают содержимое стерильным шпателем или чем-либо подобным, после того как
упаковка открыта, чтобы получить гомогенную пробу.
d) Открывают упаковку, извлекают требуемое количество пробы стерильным шпателем или пи
петкой и переходят к следующему.
e) Берут навеску пробы с точностью 0,05 г массой (10 ± 0.1) г.Добавляют навеску к разбавителю в
каждую склянку.
0 Встряхивают склянку 10 раз. движением с амплитудой 300 мм в течение приблизительно 7 с.
д) Исследование начинают незамедлительно (8.5).
После приготовления первичного разведения (суспензия пробы — 1-е десятичное разведение. D1;
100 см3) немедленно готовят следующие разведения.
8.3 Исследование под микроскопом
Выполняют предварительное исследование под микроскопом в нескольких полях мазка жидкости
первичного разведения (8.2) высушенных и твердых проб, чтобы выбрать нужный диапазон разведений
для использования, особенно в тех случаях, когда изготовитель не дает информации о продукте.
В качестве альтернативы можно использовать фазово-контрастную микроскопию без выполнения
мазков.
8.4 Приготовление десятичных разведений
Общие требования приведены в ISO 6887-1. Специальные требования к выращиванию бифидо
бактерий учитывают следующее.
Описанную операцию требуется выполнять путем осторожного перемешивания в стандартизован
ных условиях, установленных ниже.
Разведения готовят следующим образом:
a) Встряхивают первичное разведение (8.2) предпочтительно 10 раз. движением руки с амплиту
дой примерно 300 мм, приблизительно в течение 7 с для достижения гомогенности.
b
) Пипеткой (6.9) переносят 1см5первичного разведения (исходная бактериальная суспензия)
в пробирку (6.8), содержащую 9 см3 стерильного разбавителя при соответствующей температу
ре (5.2).
c) Тщательно перемешивают разведение в течение 3 с с помощью вихревого смесителя (6.2).
Для последующих разведений поступают аналогичным образом, пока не будет получена требуемая
рабочая плотность от 200 КОЕУсм3до 500 КОЕ/см3. Перемешивают всегда одинаковым образом, на
пример, в течение периода в 3 с. Для каждого этапа разбавления используют свежую стерильную пи
петку (6.9).
Необходимо избегать попадания в пипетку воздушных пузырьков. Необходимо позаботиться о том,
чтобы из пипетки было полностью слито содержимое, особенно при переносе пор с более высокой кон
центрацией.
8.5 Посев
Переносят стеканием по капле 1 см3каждого из соответствующих этапов разведения (рекоменду
ется четыре десятичных разведения в рамках каждой области подсчета) в каждую пустую чашку Петри,
используя по две параллельных чашки на разведение. Наливают в чашки Петри питательную среду в
объеме от 12 см3 до 15 см3(5.3.3). Осторожно перемешивают разбавитель в чашках Петри круговыми
движениями, не захватывая воздух.
П р и м е ч а н и е — Чтобы ограничить диапазон подсчета до заданного интервала, особенно если предпо
лагается большое количество микроорганизмов (6J. можно высеивать только те десятичные разведения (как мини
мум. два последовательных разведения), которые необходимы для облегчения правильного подсчета (ISO 7218).
В качестве альтернативы применяют технику автоматического распределения препарата, под
твержденную со ссылкой на настоящий стандарт.
8.6 Продолжительность опыта
Время с момента приготовления первичного разведения (при готовом исходном разведении) до
момента добавления питательной среды не должно превышать 15 мин по (8).
6