ГОСТ ISO 29981—2013
8.7 Инкубирование
Сразу после застывания среды переворачивают все чашки Петри и ставят в анаэробный сосуддля
инкубации или в анаэробный инкубатор (6.1) и выдерживают при температуре 37 ®С в течение (72 ± 3)ч.
8.8 Подсчет колоний
Подсчитывают колонии после инкубации, учитывая только этапы разведения в рамках обсчитыва
емой области (т. е. разведения, для которых ожидаемое среднее количество на чашку х< 300 КОЕ по
ISO 7218).
Выполняют подсчет на чашках выбранных разведений, учитывая все колонии на чашке непосред
ственно после инкубации.
Чашки обследуют в затененном освещении. Для облегчения счета используют подходящее обору
дование подсчета колоний (6.3). При подсчете точечных колоний следует не путать их с нерастворенны-ми
частицами пробы или осажденным материалом. Тщательно обследуют не вызывающие сомнений
объекты с помощью лупы большего увеличения, если требуется, чтобы отличить колонии от
постороннего материала.
После инкубации сразу же обследуют чашки. Чашки держат в холодильнике в течение максимум
48 ч (ISO 7218).
8.9 Считывание чашек Петри — подтверждение
Идентифицируют колонии бифидобактерий по белесому цвету. Выбирают типичные колонии (3.1)
из чашек, используемых для подсчета колоний, и исследуют под микроскопом.
Дополнительно можно провести анализ с помощью F6PPK. чтобы подтвердить результаты [14],
[15].
П р и м е ч а н и е — Некоторые штаммы бифидобактерий могут давать колонии разных размеров и внешне
го вида на одной и той же чашке. Большинство колоний бифидобактерий выделяют запах уксусной кислоты.
9 Расчет и обработка результатов
9.1 Расчет
Используют все подсчеты на чашках разведений в рамках обсчитываемой области, полученные в
8.7. Обсчитываемая область включает все разведения, для которых ожидаемое среднее количество ко
лоний на чашку И<. 300 КОЕ.
Рассчитывают число КОЕ презумптивных бифидобактерий на грамм продукта N по формуле
N -
-----------
-----------------.(2)
(о, -0,1л2 +0.01/)3)<J
где £ х, — сумма колоний, подсчитанных на всех оставшихся чашках (8.8);
л, — число оставшихся чашек в первом обсчитываемом разведении;
п2— число оставшихся чашек во втором обсчитываемом разведении;
л3— число оставшихся чашек в третьем обсчитываемом разведении,
d — коэффициент разбавления, соответствующий первому обсчитываемому оставшемуся раз
ведению.
Если осталось только два обсчитываемых разведения, формула принимает вид:
Л/ = —
2^--
.(3)
(л, + a in 2)<*
Определяют надежность подсчета колоний, полученных на параллельныхчашках, и последующие
разведения в соответствии с ISO 14461-2J1DF 169-2. Для вычисления результата используют толькодос
товерный подсчет (ISO 7218).
9.2 Обработка результатов
Результаты выражаютдо двух значащих цифр как число КОЕ бифидобактерий на грамм продукта,
представляют числоот 1,0до 9.9, умноженное на 10 всоответствующей степени. Достоверность резуль
тата по 10.4.
7