ГОСТ ISO 29981—2013
4.3 Подсчет колоний
П р и м е ч а н и е — Выбранные культуры из чашек можно подтвердить соответствующими тестами по
114]. (15].
4.4 Количество бифидобактерий в грамме пробы рассчитывают по числу колоний, полученных в
чашках с разведениями такой концентрации, чтобы получить значимый результат.
5 Питательные среды, разбавители и реактивы
Используют реактивы только признанной аналитической чистоты, если нет иных указаний, идис
тиллированную или деминерализованную воду, или воду равноценной чистоты.
5.1 Основные материалы
Основные материалы — по ISO 6887-5 и ISO/TS 11133-1.
5.2 Разбавители
Приготовление разбавителей — по ISO 6887-5.
Чтобы обеспечить сопоставимость результатов в установленных колониеобразующих единицах
(КОЕ), соблюдают следующие правила.
Используют раствор Рингера (Ringer’s) с 1/4 концентрации или любойдругой подходящий разбави
тель. установленный в ISO 6887-5 и подтвержденный как эквивалентный.
Стерилизуют и используют подходящий стерильный дозатор.
Доводят разбавитель до температуры (22 ± 2) °С. Переносят разбавитель стеканием каплями, не
захватывая воздух.
Неопределенность измерения используемых объемов должна соответствовать требованиям
ISO 6887-1.
5.3 Питательная среда (среда TOS-MUP)
Используют свежеприготовленную среду на основе обработанных трансгалактозой олигосахари
дов с добавлением литиевой соли мупироцина (TOS-MUP). защищенную от прямого солнечного света.
5.3.1 Основная среда (среда TOS-пропионат на агаре [10])
5.3.1.1 Состав:
пептон триптиказа — 10,0 г.
дрожжевой экстракт — 1.0 г,
КН2Р04— 3,0 г;
К2НР04 — 4.8 г;
(NH4)2S04— 3,0
г
,
MgS04-7H20 — 0.2 г.
(Р)-Цистеин •HCI •Н20 — 0.5 г.
пропионат натрия — 15,0 г.
TOS (см. 5.3.1.2)— 10.0 г.
агар-агар — 15,0 г
вода — 950 см3.
5.3.1.2 Смесь олигосахаридов — трансгалактозы
Смесь TOS получают ферментативным гидролизом лактозы, используяр-галактозидазу4spen3<7/i/s
огусоае. Смесь TOS содержит галактозу (Gal) и глюкозу (Glc), вычисляемых по формуле
[Gal— (Gal)„Glc],(1)
где п = 1 ... 4;
х =р - 1,6 >р -1,4 и 0-1,3;
у =р - 1.4 » 0-1,3 и 0-1,6.
Смесь TOS очищают с помощью хроматографии в определенных условиях по [18]. [19]. Общее со
держание сахара (>97 % по массе) включает определеннуючасть три-, тетра-, пента- и гексасахаридов.
(Изменение соотношения олигосахаридов не оказывает заметного влияния на потенциал среды.)
5.3.1.3 Приготовление
Суспендируют ингредиенты в 950 см3воды при осторожном нагревании (например, на нагрева
тельной плитке или водяной бане) при частом помешивании до полного растворения.
з