ГОСТ ISO 29981—2013
Распределяют по склянкам вместимостью 250 см3по 190 см3в каждую. Регулируют pH (6.6). при
необходимости, так чтобы после обработки в автоклаве установился pH на уровне 6,3
а
0.2 единиц при
температуре 25 °С.
Обрабатывают в автоклаве основную среду при температуре 115 вС в течение 15 мин.
Если среду не используют сразу, тоее охлаждают. Хранят среду при температуре от 2 °С до 4 "С не
более одной недели в условиях, не вызывающих изменения состава среды.
Среда TOS чувствительна к теплу, поэтому избыточная тепловая обработка может отрицательно
сказаться на свойствах среды. Полные среды TOS-пропионат имеются в продаже и имеют состав, соот
ветствующий настоящемустандарту. Если сроду готовят в лаборатории, то результаты могутсуществен но
отличаться для сред, приготовленных в разное время. Поэтому среды рекомендуется подтверждать,
чтобы убедиться, что рост бифидобактерий, указанный в единицах КОЕ. остается на сопоставимом
уровне (см. также ISO/TS 11133-1).
5.3.2 Вспомогательный раствор MUP [11]
Непосредственно перед применением, растворяют, например. 50 мг MUPв 50 см3воды илидругие
количества в тех же пропорциях. Стерилизуют полученный раствор фильтрацией через мембрану (раз
мер пор 0,22 мкм) в соответствии с 5.3.3.
5.3.3 Полная среда
Непосредственно перед применением расплавляют порции по 190 см3приготовленной основной
среды (5.3.1) с помощью пара или аналогичным способом. Охлаждают на водяной бане (6.5) до темпе
ратуры (48 ± 1) °С. Добавляют 10 см3вспомогательного раствора MUP (5.3.2) в каждую склянку шпри цем.
оснащенным стерильным фильтром с размером пор 0.22 мкм (6.11) незадолго до разливки.
Тщательно перемешивают, без образования пузырьков воздуха.
Снова помещаютполную среду на водяную баню (6.5) при температуре 48 °С идержат, пока она не
будет готова к разливке.
Полная среда TOS-MUP должна иметь конечную концентрацию MUP, равную 50 мг/дм3.
6 Оборудование
Стерилизация оборудования, которое контактирует с анализируемой пробой, разбавителем, раз
ведениями или питательной средой, должна осуществляться в соответствии с требованиями ISO
6887-5, а также ISO/TS 11133-1. Стеклянная посуда должна выдерживать многократную стерилиза цию.
Используют оборудование микробиологических лабораторий (ISO 7218). для приготовления проб
для анализа и разведений, в соответствии с требованиями ISO 6887-5.
6.1 Оборудование для инкубирования (термостатирования), обычно применяемые
сосуды, или анаэробный инкубатор
6.1.1 Инкубатор (термостат), обеспечивающий поддержание температуры (37
а
1) °С.
6.1.2 Анаэробные культуральные склянки, обеспечивающие поддержание анаэробной атмосфе
ры. содержащей от 10 %до 20 %диоксида углерода по массе: приблизительно от 70 %до 90 % азота по
объему и приблизительно 10 % водорода по объему (необязательно). Газовая смесь не должна
содер жать более 1 % кислорода по объему.
Допускается применять другие безопасные низкотемпературные каталитические системы.
6.1.3 Анаэробный инкубатор, поддерживающий температуру на уровне (37 ♦ 1) °С. обеспечивая
анаэробную атмосферу (см. 6.1.2).
6.2 Механическая мешалка, обеспечивающая перемешивание содержимого пробирок, например
вихревой смеситель.
6.3 Оборудование для подсчета колоний, в соответствии с ISO 7218.
6.4 Лупа, от 8- до 10-кратного увеличения.
6.5 Водяные бани, обеспечивающие поддержание температур (20 ± 1) °С, (45
а
1)°С, (48 ± 1) °С.
6.6 pH-метр, с температурной компенсацией, точностью до ±0,1 pH при температуре 25 еС.
6.7 Колбы и склянки, вместимостью 250 см3с плотными пробками или крышками (для помещения
питательной среды и приготовления начального разведения анализируемой пробы).
6.8 Пробирки, высотой порядка 150 см3 идиаметром примерно 15 мм с подходящими крышками.
4