ГОСТ 32014—2012
Разделение проводят в режиме градиентного элюирования (приготовление растворов элюентов
согласно6.3.7): в начальный момент — соотношениефазы А/Б пообъему (80/20). с 0,0по 8.0 мин — гра
диентное элюирование к 95 % фазы Б. с 8,0 по 10,0 мин — элюирование в 95 % фазы Б. с 10.0 по
10,5мин — переходкэлюированиювфазеА/Бпообъему(80/20).с10,5по15,0мин — уравновешивание
колонки в фазе А/Б по объему (80/20).
6.6.2 Для настройки масс-спектрометрического детектора применяют следующие параметры:
- температура источника — 120 °С;
- температура газа десольвации — 450 °С;
- скорость потока газа десольвации — 650 дм3/ч;
- скорость потока вспомогательного газа — 80 дм3/ч.
6.7Подготовка лабораторной посуды и реактивов
6.7.1 Мойку и сушку посуды следует проводить в отдельном помещении, оборудованном приточ
но-вытяжной вентиляцией. Не допускается проведение подготовки посуды в данном помещении для
других видов анализов. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо
использо вать отдельные сушильные шкафы.
6.7.2 Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды с
последующей последовательной промывкой органическими растворителями: этилацетатом (однократ
но), ацетоном (дважды).
6.7.3 Процедуру промывки органическими растворителями следует проводить в вытяжном шкафу.
Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку посуды
проводят всушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105 °С до 110 °С.
7 Порядок выполнения измерений
7.1 Обработка проб органов, тканей животных и креветок
7.1.1 Мышечную ткань предварительно очищают от грубой соединительной ткани и грубого хити
нового покрова. 100 гмышечной ткани измельчают на гомогенизаторе и взвешивают по 1,0 ггомогенизи
рованной ткани в полипропиленовой виале вместимостью 50 см3.
7.1.2 Удаление несвязанных метаболитов*
В виалу с гомогенизированной тканью (см. 7.1.1) добавляют 1см3деионизированной воды и 4 см3
охлажденного метанола, тщательно встряхивают и помещают на предварительно охлажденную до 4 °С
центрифугу и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 15 мин. После центрифугирования удаляют
органический слой. Образец вновь промывают трижды, добавляя каждый раз по 4 см3 охлажденного
метанола и удаляя органический слой. Затем процедуру экстракции и центрифугирования повторяют:
дважды сдобавлением 4 см3охлажденного этилового спирта и дважды с добавлением 4
см3охлажден ного серного эфира, также удаляя органические слои. Объединенные экстракты
собирают в чистую виалу.
7.1.3 Для гидролиза и дериватизации в виалу с гомогенизированной тканью по 7.1.1 или в виалу с
экстрактом по7.1.2добавляют 50 мм3раствора внутреннегостандарта (см. 6.4.5). тщательно встряхива
ют и оставляют на 15 мин. Добавляют 5см3соляной кислоты (см. 6.3.1) и 75 мм3раствора НБА в метано ле
(см. 6.3.4). Виалу закрывают крышкой и интенсивно перемешивают на встряхивателе в течение 10
мин.затем помещают на нагревательный модуль при температуре 37 еС на 16 ч.
7.1.4 Для нейтрализации по истечении 16ч виалу собразцом снимаютс нагревательного модуля и
охлаждаютдо комнатной температуры. После охлаждениядобавляют 0,5 см3раствора натрия фосфор
нокислого додекагидрата по 6.3.5 и тщательно перемешивают. Доводят pH до значения 7,0 при помощи
раствора гидроокиси натрия (см. 6.3.3). Вновьтщательно перемешивают и оставляютна 5 мин. Значение
pH проверяют по индикаторной бумаге и, при необходимости, доводят до нужного значения.
7.1.5 Для экстракции нитрофенильныхпроизводныхкнейтрализованномуобразцудобавляют4 см3
этилацетата и интенсивноперемешивают навстряхивателе в течение 10 мин. Затем помещаютна предва
рительно охлажденную до 4 °С центрифугу и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин. Органи
ческий слой количественно переносят в круглодонную колбу. Данную процедуру повторяют два раза.
Объединенные экстракты упаривают на ротационном испарителе при температуре от40 °С до 45 °С.
* При определении связанных (образующих комплексы с белками) метаболитов, до процедуры гидролиза и
дереватизации, необходима предварительная отмывка образцов от несвязанных (находящихся в свободном со
стоянии) метаболитов. При определении общих метаболитов предварительную процедуру отмывки не используют.
8