ГОСТ ISO 21871—2013
5.4 Твердая селективная среда: агар с полимиксином, пируватом, яичным желтком,
маннитом и бромтимоловым синим (PEMBA) по [2]
5.4.1 Основа питательной среды
5.4.1.1 Состав
Продукт ферментативного переваривания казеина, г
1.0
D-Маннит, г
10.0
Пируват натрия, г
10.0
Сульфат магния (MgS0^7H„O). г
0.1
Хлорид натрия, г
2.0
Гидрофосфат динатрия (Na
3
HP04), г2.5
Дигидрофосфат калия (КН
2
Р 04), г 0.25
Бромтимоловый синий, г
0.12
Агар, г
*1
9 -1 8
Вода,см
3
940
"1
В зависимости от прочности геля агара.
5.4.1.2 Приготовление
Компоненты или готовую сухую основу питательной среды растворяют в воде, нагревают на сла
бом огне до кипения и кипятят 2—3 мин при постоянном перемешивании.
При необходимости корректируют pH так. чтобы после стерилизации он был равен 7,2 ±0,2 ед. pH
при температуре 25 5С.
Стерилизуют вавтоклаве (6.1) при температуре 121 °С втечение 15 мин.
5.4.2 Раствор сульфата полимиксина В
Готовят по 5.3.2.
5.4.3 Эмульсия яичного желтка
Используют свежие чистые куриные яйцаснеповрежденной скорлупой. Яйца промывают вжидком
моющем средстве, используя щетку.Ополаскивают впроточнойводе, погружают в70 %-ный (по объему)
раствор этилового спирта на 30 с и высушивают. Соблюдая стерильность, разбивают каждое яйцо и
отделяют желток отбелка путем многократного переносажелтка с одной половины яичной скорлупы на
другую. Желтки помещаютвстерильный мерный цилиндридобавляют четыре объемные части стериль
ной воды. Соблюдая стерильность, переносятсодержимое встерильную колбу (6.7) и интенсивно пере
мешивают.
Смесь нагревают в течение 2 ч на водяной бане (6.4), при температуре 47 °С. Затем оставляют на
18— 24 ч при температуре (3 ± 2) °С для образования осадка.
Надосадочную эмульсию собирают встерильных условиях.
Эмульсию можнохранить при температуре (3 ± 2) °С не более 72 ч.
Обе твердыеселективные среды, описываемые внастоящем стандарте, были первоначальнопри
готовлены из 20 %-ной эмульсии яичного желтка, какэто изложено в(3]. Допускается использовать гото
вые эмульсии яичного желтка с различной концентрацией. Вместе с тем. необходимо следовать
инструкциям производителя, особеннокасающихся времени хранения.Следует принять мерыдляобес
печения того, чтобы данная эмульсия была пригодна для использования впитательных средах, описан
ных в5.4 и5.5.
5.4.4 Полная среда (агар PEMBA)
5.4.4.1 Состав
Основа питательной среды (5.4.1). см
5
940
Раствор сульфата полимиксина В (5.4.2). см
3 10
Эмульсия яичного желтка (5.4.3). см
3
50
5.4.4.2 Приготовление
В основу питательной среды (5.4.1). расплавленную и охлажденную до температуры 47 °С, добав
ляютдругие компоненты, раздельно при непрерывном перемешивании.
5.4.4.3 Приготовлениечашек Петри с агаром
Переносят около 12,5 см3аликвоты полной среды вчашки Петри (6.9) идают им затвердеть.
П р и м е ч а н и е — Ввиду технических причин (2J. вместо обычного количества 15 см
3
используют 12.5 см3.
4