ГОСТ 31744—2012
Наливают в обе чашки от 10 до 15 см3 SC агара (см. 5.2.3). подогретого в водяной бане (см. 6.10)
при температуре от 44 до 47 °С, и хорошо перемешивают с испытуемой пробой, осторожно вращая
чашки. После затвердевания среды добавляют сверху 10 см3дополнительно SC агара.
Оставляют чашки для затвердевания агара. Застывшие чашки агара с исходной пробой поме
щают в аиаэростат или другие приборы, обеспечивающие культивирование анаэробных микроорганиз
мов. и инкубируют в анаэробных условиях в течение (20 ± 2) ч при температуре 37 °С.
Более продолжительное инкубирование может привести к излишнему почернению среды.
Повторяют процедуру с последующими десятикратными разведениями (см. 9.1).
9.3 Подсчет и выделение колоний
После установленного периода инкубации (см. 9.2) выделяют все чашки Петри, содержащие ме
нее 150 колоний. Из них выделяют чашки с двумя последовательными разведениями. Подсчитывают на
каждой чашке характерные колонии, предположительно относящиеся к С. perfringens.
Выделяют из каждой чашки 5 типичных колоний и подтверждают их. используя одну из методик,
описанных в 9.4.2 или 9.4.3.
9.4 Биохимическое подтверждение
9.4.1 Общие положения
Для целей подтверждения может быть использован набор сред для биохимических испытаний в
соответствии с ГОСТ ISO 7218.
9.4.2 Методика подтверждения с использованием сроды LS
П р и м е ч а н и е — Реакция, протекающая в лактозо-сульфитной среде (см. 5.4) при 46 °С, очень специфич
на для С. perfringens и С. absonum. Поэтому не обязательно добиваться дополнительной очистки черных колоний,
выделенных с агаровой среды, перед их посевом на тиогликолагную и затем на лактозо-сульфитную среду.
9.4.2.1 Пересев и инкубирование
Каждую изолированную колонию (см. 9.3) пересевают на жидкую тиогликолатную среду (см. 5.3).
Инкубируют в анаэробных условиях в течение 18—24 ч при температуре 37 °С.
3.4.2.2 Обработка результатов
Исследуют пробирку с LS средой, учитывая образование газа и наличие черного окрашивания
(осадок сульфита железа). Трубки Дархема, заполненные более чем на одну четвертую часть газом, и
пробирки, содержащие черный осадок, оценивают как положительные.
В сомнительных случаях, когда трубка Дархема в пробирке с почерневшей средой заполнена
газом менее чем на четверть, без промедления с помощью стерильной пипетки переносят 5 капель
культуры с LS средой (см. 9.4.2.1) в другую пробирку с той же средой. Инкубируют на водяной бане (см.
6.10) при температуре от 46 °С в течение 18 — 24 ч. Оценивают эти пробирки как описано выше.
Бактерии, которые образуют типичные колонии на LS среде и дают положительную реакцию под
тверждения на LS среде, относят к С. perfringens. Во всех прочих случаях пробирки с посевами рас
сматривают как отрицательные.
9.4.3 Методика подтверждения с использованием подвижной нитратной сроды и лактозо
желатиновой среды
9.4.3.1 Общие положения
Для данной методики подтверждения требуются хорошо изолированные типичные колонии. Если
их нет (т.е. они чрезмерно разрослись на поверхности чашек, и нет возможности выбрать хорошо изо
лированные типичные колонии), засевают пять типичных колоний на предварительно деаэрированные
жидкие тиогликолатные среды (см. 5.3).
Инкубируют в анаэробных условиях при температуре 37°С в течение 18—24 ч. Штрихуют колонии
на чашках с основным агаром SC (см. 5.2.1.2) и добавляют сверху 10 см3основного агара SC.
Дают застыть агару и инкубируют в анаэробных условиях при температуре 37 °С в течение
18—24 ч. Потом выбирают из каждой чашки одну типичную и хорошо выделенную колонию.
При необходимости повторяют штрихование и посев на чашки Петри с основным агаром SC до
получения хорошо изолированных, типичных колоний.
Подтверждают каждую колонию как описано в 9.4.3.2. 9.4.3.3 и 9.4.3.4.
9.4.3.2 Инокуляция и исследование подвижной нитратной среды
Инокулируют уколом каждую выделенную колонию (см. 9.3) в только что деаэрированную под
вижную нитратную среду (см. 5.5).
7