ГОСТ Р 51196—2010
мическом анализе пищевых продуктов и опубликованные в специальной литературе [3]. Принимают
требуемые меры для получения надлежащих результатов. Данную проверку качества реактивов
повторяют, пока не будут получены удовлетворительные результаты.
П р и м е ч а н и е - Степень повторного нахождения {ПН) — доля измеренного копичества.
8.2 Определение
8.2.1Необходимые количества компонентов инкубационной смеси вносят, используя соотве
тствующую пипетку (см. 6.5). в кювету (см. 6.12) спектрофотометра (см. 6.11) в соответствии с табли
цей 1.
Т а б л и ц а1 — Аналитическая схема ферментативного определения L- и D-молочных кислот (L- и D-лактатов)
Реактивы, дозируемые в кювету, см’
Обозначение кювет
Контрольная проба
Стандарт D-лактата
лития
Стандарт L-лактата
лития
Проба
Дистиллированная вода
1.000
—
—
—
Стандарт (см. 8.1.2)
—
1.000
1,000
—
Проба (см. 7.4.3)
—
—
—
1,000
Буферный раствор, pH 10 (см. 5.6)
1.000
1.000
1.000
1,000
Раствор НАД’ (см. 5.7)
0.200
0.200
0.200
0,200
ГПТ (см. 5.10)
0.020
0.020
0,020
0.020
L-ЛДГ (см. 5.8)
0.020
—
0.020
0.020
D-ЛДГ (см. 5.9)
0.050
0,050
—
0,050
Содержимое всех кювет перемешивают при помощи пластикового шпателя (см. 6.10) илизакрыва
ют кювету и переворачивают несколько раз. После перемешивания кюветы выдерживают 5 мин при
комнатной температуре передтем, как измерить оптическую плотность (Аь0 иДь0) инкубационной смеси
во всех кюветах относительно воды при длине волны 340 нм.
Через 45 мин измеряют повторно оптическую плотность инкубационной смеси во всех кюветах
{AbiS и Д 45) относительно воды при длине волны 340 нм.
Следующее измерение проводят через 60 мин. Измеряют оптическую плотность инкубационной
смеси во всех кюветах (Дд0и Д в0) относительно воды при длине волны 340 нм.
L- или D-молочную кислоту и L-ZD-лактаты можно определять отдельно путем добавления либо
L-ЛДГ (см. 5.8), либо D-ЛДГ (см. 4.9).
В случае измерений только L-молочной кислоты и L-лактатов оптическую плотность измеряют че
рез 30 и 45 мин после перемешивания соответственно.
8.2.2Фактическое значение оптической плотности А. которое будет использовано в вычислениях
по 9.1, рассчитывают по формуле
А = К4во —4о) —ЧАМ - Д
45
И “ К4*о “ 4о) “ ^Иьео - Д>45)1,(3)
где А*о — оптическая плотность пробы через 60 мин по 8.2.1;
Аю — оптическая плотность пробы по 8.2.1;
А-м — оптическая плотность пробы через 45 мин по 8.2.1;
4«о — оптическая плотность контрольной пробы через 60 мин по 8.2.1;
Аьо— оптическая плотность контрольной пробы по 8.2.1;
A
ms
— оптическая плотность контрольной пробы через 45 мин по 8.2.1.
Иногда может иметь место медленно текущая побочная реакция. Влияние на оптическую плот
ность, оказываемое данной побочной реакцией, может быть устранено путем экстраполяции к оптичес
кой плотности при нулевом времени. Дополнительная информация о медленно текущих побочных
реакциях и устранении их влияния на результаты основных ферментативных реакций — см. [3].
5