ГОСТ Р 51196—2010
А.3.8 Всегда используют один и тот же тип кювет для измерения оптической плотности пробы и контрольного
определения.
А.3.9 Стеклянные или кварцевые кюветы всегда помешают в одинаковое положение в держателе кювет. Для
этих целей помечают одну оптическую сторону кюветы. На грани пластиковых кювет, предназначенной для измере
ния оптической плотности, нанесена специальная метка.
А.4 Фотометры и спектрофотометры
А.4.1 Используют спектрофотометр (ширина спектральной полосы пропускания £ 10 нм) с монохроматором,
фотометр, снабженный фильтрами (ширина спектральной полосы пропускания фильтров £ 10 нм), или спектраль
ный фотометр, снабженный ртутной пампой. Измерения, проводимые с использованием спектрофотометра или
фотометра, осуществляют при длине волны, соответствующей максимальной оптической плотности НАДН и
НАДФН. т. е. при 340 нм. Измерения, проводимые с использованием спектрального фотометра с ртутной лампой,
осуществляют при 365 или 334 нм.
П р и м е ч а н и е — Коэффициенты оптической плотности (экстинкции) НАДН и НАДФН. измеренные при
334. 340 и 365 нм, являются следующими:
а) НАДН и НАДФН при 334 нм (Нд): 6.18 к 10йсм^/моль:
Ь> НАДН и НАДФН при 340 нм (Нд): 6.3 х 10всм2/моль;
с) НАДФН при 365 нм (Нд): 3.5 к 10есмг/моль:
в) НАДН при 365 нм (Нд): 3.4 * 10ясмг/моль.
А.4.2 Технические характеристики спектрофотометра, фотометра или спектрального фотометра должны
обеспечивать линейную зависимость между значениями оптической плотности (вплоть до 2.000 ед.) и концентра
цией НАДН или НАДФН. Линейную зависимость проверяют следующим образом:
a) отбирают пипеткой 2,000 см3дистиллированной воды в кювету и измеряют оптическую плотность Аа отно
сительно воды;
b
) отбирают пипеткой 0.100 см3 раствора НАДН (0.5 мг/см3) в кювету: перемешивают содержимое кюветы и
измеряют оптическую плотность А\.
Рассчитывают сниженную оптическую плотность А,, по формуле
*,i“(*«-A»)-2.m.s.
Повторяют процедуру проверки линейной зависимости 14 раз. как это описано выше.
После каждой пары измерений рассчитывают сниженную оптическую плотность Атпо формуле
* п в И .,-*о ) ■W3.5.
где Ап — оптическая плотность при измерении л;
V — объем содержимого кюветы при измерении п, см3.
Для каждого измерения строят график значений объема раствора НАДН в кювете с соответствующими значе
ниями сниженной оптической плотности. Значение корреляции измерений должно быть более 0.99. Для текущей
поверки спектрофотометра, фотометра или спектрального фотометра может быть использована методика, опуб
ликованная в (3].
А.5 Автоматические пипетки и другие дозирующие устройства
А.5.1 Используют автоматические пипетки и другие дозирующие устройства в соответствии с инструкциями
производителя.
А.5.2 Используют надлежащие наконечники для каждой пипетки.
А.5.3 Необходимо периодически (например, ежемесячно) проверять технические параметры, касающиеся
объема и повторяемости автоматических пипеток и других дозирующих устройств, как это указано ниже.
Взвешивают стеклянный химический стакан с дистиллированной водой при значении времени /. Отбирают
пипеткой или дозирующим устройством один объем воды встакан и точно взвешивают при (f+1) мин после первого
взвешивания. Повторяют процедуруотбора объема воды пипеткой или дозирующим устройством девять раз. Взве
шивают стакан, без отбора объема воды пипеткой или дозирующим устройством, в моменты ((♦ 11). (!♦ 12). ((♦ 13). (f ♦
14) и ((♦ 15) мин. Рассчитывают из этих взвешиваний потери на испарение за минуту. Рассчитывают объем и по
вторяемость дозирования воды пипеткой или дозирующим устройством, принимая во внимание потерю воды при
испарении.
А.5.4 Передача тепла от ладони руки во время продолжительного использования может повлиять на объем
дозируемой пробы при использовании некоторых автоматических пипеток.
Необходимо проверить это явление путем процедуры, описанной вА.5.3. и избегать использования таких пи
петок.
А.5.5 Непосредственно перед использованием следует ополоснуть наконечник пипетки несколько раз рас-
теором/суспензией. которая будет использована для отбора и дозирования. Для каждого раствора пробы следует
использовать новый наконечник.
9