ГОСТ РЕН 12469—2010
Инкубировать чашки в течение (48 г 2) ч при (37
±
0.5) ‘С. Разбавить суспензию спор с помощью фосфатного
буфера PBS до достижения конечной концентрации спор (5—8)-10® спор/мп. еспи споры испопьзуют немедпенно.
Хранить запассуспензии спор (2—4)-10®спор/мл при 4 “С или, разделив неопределенное количестводля хранения
во флаконах с завинчивающимися крышками, при минус 70 ‘С. депая частые проверки на жизнеспособность преи
мущественно методом окрашивания спор.
Метод В
Инокулировать порции стерильного триптозного бульона по 250 мл определенным количеством полученных
ранее спор в. subtilis или ресуспендироаанных лиофильно высушенных культур, следуя указаниям инструкций
АТСС или NCTC. Инкубировать суспензию в соответствующем шейкере в течение (48
±
2)ч при (37
±
0.5) !С. Полу-
ченную культуру нагревать при (65
±
0,5)®С в течение 15 мин.
Перенести суспензию вофлаконы сзавинчивающимися крышками ипромыть минимум три раза в стерильной
дистиллированной водеспомощью центрифуги при 1500 об./минв течение 10мин. Еслипланируется хранение, при
последней промывке использоватьфосфатный буфер PBS. Определить концентрацию спор методом стандартных
разведений, используя фосфатный буфер PBS и триптический соевый агар. Споры, приготовленные вышеописан
ным способом, должны дать урожай в среднем в количестве 1.5 109спор/мл.
Инкубировать чашки в течение (48
±
2) ч при (37
±
0.5) °С. Если суспензия спор должна быть использована
немедленно, разбавить суспензию фосфатным буфером PBS до достижения конечной концентрации спор в коли
честве (5—8) 10®спор/мл. Суспензию разделить неопределенное количество и хранить при 4 ®С встерильных фла
конах с завинчивающимися пробками или хранить в морозильной камере при минус 70 °С. Перед использованием
проверить жизнеспособность спор.
С.2.2 Оборудование
Чашки Петри размером 100 *15 мм или 150 *22 мм. содержащиепитательный агар, триптический соевый агар
или другую подходящую питательную среду без ингибиторов или других добавок.
Шесть стеклянных импинджеров (см. (9)). диаметр капилляров 1.3 мм. объемный расход откалиброван на
12.5л/мин. содержащий 20 мл стерильного разбавителя.
Два пробоотборника воздуха с расходом (30
±
3) л/мин3>.
Жидкостный 6-струйный модифицированный распылитель Коллисон типа MRE (например, модель CN-38
компании BGI Inc.. Уолтхэм МА. США41’ или другой распылитель, который может быть использован для создания
бактериального аэрозоля с подобными характеристиками.
Цилиндр из нержавеющей стали или алюминиевого сплава внешним диаметром 63 мм и с закрытыми торца
ми. Цилиндр предназначендля имитации нарушения воздушного потока.Длина цилиндра зависит от размера внут
реннего пространства бокса. Цилиндр должен упираться одним концом в заднюю стенку бокса, а другой конец
должен выступать на расстояние минимум 150мм в комнату через рабочий проем бокса.
С.2.3 Процесс
Выбрать и откалибровать распылитель, как указано в С.4.
Встряхнуть распылитель, содержащий до55 мл суспензии спор J<5—8) Ю 8 спор/мл Bacillus subtilis), и устано
вить его по центру между боковыми стенками рабочего пространства бокса. Для боксов класса I убедиться, что ось
струи расположена ниже цилиндра и приблизительно в центре между его нижней поверхностью и
рабочей поверхностью бокса. Для боксов класса II убедиться, что ось струи находится наравне с верхней кромкой
рабочего проема.
Убедиться, чтоотверстие распылителя расположено на расстоянии 100 мм за плоскостью рабочего проема и
что ось струи параллельна рабочей поверхности и направлена прямо на рабочий проем.
Установить цилиндр в центре бокса. Убедиться, что ось цилиндра расположена на высоте 69 мм выше рабо
чей поверхности. Расположить вокруг цилиндра четыре импинджера с пробоотборными отверстиями на расстоя
нии 63 мм от рабочегопроема свнешней стороны бокса. Расположитьдва импинджера таким образом, чтобы оси их
пробоотборных отверстий находились на расстоянии 150 мм друг от друга в горизонтальной плоскости, касатель
ной кверхней частицилиндра. Установитьоставшиесядва импинджера так. чтобы оси ихпробоотборных отверстий
были на расстоянии 50 мм друготдруга и лежали в горизонтальной плоскости на 20 мм ниже цилиндра. В качестве
контрольной проверки установить чашку сагаром под центром ципиндра и убедиться втом.чтоона стоит на рассто
янии 10 мм выше или ниже передней приточной решеткидля уменьшения препятствия воздушному потоку.
3) Щепевые пробоотборники воздуха со скоростью воздуха в щели (60 ; 10) м/с. Расстояние между нижним
краем отверстия и поверхностью агаровой среды не должно более чем в 3—6 раз превышать расстояние между
верхним и нижним краями щели. Для каждого вида испытания требуются даа пробоотборника щелевого вида.
41 Модель распылителя CN-38 является примером подходящего оборудования, имеющегося а продаже. Эта
информация дается дпя удобства пользователей настоящего стандарта и не является подтверждением соот
ветствия этой продукции требованиям CEN (Европейского комитета по стандартизации).
13