ГОСТ РЕН 12469—2010
Приложение С
(обязательное)
Проверка эффективности удержания в рабочем проеме бокса
С.1 Общие положения
С.1.1 Основные принципы
БМБ испытывается на эффективность удержания в рабочем проеме путем создания внутри бокса спорового
аэрозоля либо аэрозоля раствора йодида калия (К1> с последующим подсчетом количества спор или частиц,
собранных в определенных точках перед рабочим проемом снаружи бокса.
Введением цилиндрачерез передний проем имитируется присутствие руки оператора, приводящего к возму
щению потока воздуха, входящего в бокс.
Испытание проводят в заданной контрольной точке.
С.1.2 Выбор точек отбора проб
Для боксов ширинойдо 1.5 м должно быть отобранопять проб одним методом в центре рабочего проема сна
ружи бокса. Для боксов шириной от 1,5 до 2 м должно быть отобрано пять проб одним методом в центре рабочего
проема снаружи бокса, а также отобрано по пять проб одним методом а центре правой и левой половины рабочего
проема снаружи бокса. Для боксов большей ширины должно быть отобрано по пять проб одним методом в точках,
расположенных в центре каждого метра ширины рабочего проема снаружи бокса.
С.2 Микробиологический метод испытания
С.2.1 Реактивы
Споры Bacillussubtilisvar. mger(B.sublilis).ATCC1’9372.NCTC21. 10073 или В. subtilisvar. MarburgATCC 6051.
Стерильный разбавитель готовится следующим образом.
Л
ибо:
a) Раствор конечного разжижающего фосфатного буфера (PBS) (шаг 1).
Растворить 34 г КН2Р04в 500 мл дистиллированной Н20.
Довести pH до уровня 7,21 0,5с помощью NaOH при температуре 25 ‘С.
Довести до 1л дистиллированной Н20.
Конечный разбавитель PBS (шаг 2).
Дистиллированная Н20 :1л.
Исходный PBS. шаг 1:125 мл.
Конечный pH: 7,2
±
0.5.
Автоклавирование при температуре 120‘Сетечение 15мин.
Дополнительно: сульфат магния (50 гMgS04 7Н20 на 1л дистиллированной Н20): 5 мл.
либо:
b
) Дистиллированная Н20 :1л.
Довести pH до уровня 7.0
±
0.1 при температуре 25 ‘С.
Автоклавирование при температуре 120 ‘С в течение 15 мин.
П р и м е ч а н и е — Формула Ь) подходит для приготовления разбавителя, когда споровая суспензия гото
вится для немедленного использования. Если требуется хранение суспензии при температуре 4 *С,то используется
формула а).
Суспензия спор В. subtills var. nigerготовится по методу А или В следующим образом.
Метод А (используя заранее приготовленные споры б. subtills)
Ссоблюдением асептическихусловий произвести посевспорв несколькочашекПетри размером 100 *15 ммс
триптическим соевым агаром. Инкубировать в течение (48
±
2) ч при температуре (37
±
0.5) ‘С. Извлечь характерно
окрашенные колонии и поместить их вдесять стерильных флаконов объемом 220 млс завинчивающимися крышка
ми, содержащих примернопо 50 мл триптическогосоевого агара. Инкубировать в течение (48
±
2)ч при температуре
(37
±
0.5)‘С. Добавить по 10 мл PBS акаждый флакон и осторожно смыть бактерии с поверхности агара.
Перенести бактериальную суспензию в количестве приблизительно по 100 мл в стерильные флаконы
объемом 150 мл с завинчивающимися крышками. Для освобождения суспензии от остатков клеток провести трех
кратную отмывкув фосфатном буфере PBS центрифугированием при 1500об./мин в течение 10мин. Снова довести
объем суспензии в фосфатном буфере PBS до начального. Нагревать культуру при (65
±
0.5) аС в течение 15 мин.
Определить концентрацию спор с помощью методов стандартных разведений, используя фосфатный буфер PBS и
триптический соевый агар. Споры, приготовленные вышеописанным способом, должны дать концентрацию (2—4)
109спор.’мл.
" Американская коллекция стандартных культур. Роквилл. МД. США.
2> Национальная коллекция стандартных культур.
Л
ондон. Англия.
12