ГОСТ Р 53400—2009
9 Проведение определения
9.1 Метод приготовления исходной суспензии и последующие разведения
Приготовление пробы и первичного разведения в зависимости от вида продукта согласно со
ответствующей части ГОСТ 26669.
9.2 Посев и инкубирование (чашечный метод)
С помощью стерильной пипетки (см. 6.8) переносят вдвух повторностях 1 см3исходной суспензии
или испытуемой пробы (если продукт жидкий) в центр пустых чашек Петри (см. 6.9).
Наливают в обе чашки от 10 до 15 см3SC агара (см. 5.2.3). подогретого в водяной бане (см. 6.10)
при температуре от 44 °С до 47 вС, и хорошо перемешивают с испытуемой пробой, осторожно вращая
чашки. После затвердевания среды добавляют сверху 10 см3дополнительно SC агара.
Оставляют чашки для затвердевания агара. Застывшие чашки агара с исходной пробой помеща
ют ванаэростат илидругие приборы, обеспечивающие культивирование анаэробных микроорганизмов,
и инкубируют в анаэробных условиях в течение (20 ± 2) ч при температуре 37 SC.
Более продолжительное инкубирование может привести к излишнему почернению среды.
Повторяют процедуру с последующими десятикратными разведениями (см. 9.1).
9.3 Подсчет и выделение колоний
После установленного периода инкубации (см. 9.2) выделяют все чашки Петри, содержащие ме
нее 150 колоний. Из них выделяют чашки с двумя последовательными разведениями. Подсчитывают на
каждой чашке характерные колонии, предположительно относящиеся к С. perfringens.
Выделяют из каждой чашки пять типичных колоний и подтверждают их, используя одну из методик,
описанных в 9.4.2 или 9.4.3.
9.4 Биохимическое подтверждение
9.4.1 Общие положения
Для целей подтверждения может быть использован набор сред для биохимических испытаний в
соответствии с ГОСТ Р ИСО 7218.
9.4.2 Методика подтверждения с использованием среды LS
П р и м е ч а н и е — Реакция, протекающая в лактозо-сульфитной среде (см. 5.4) при 46 °С. очень специ
фична для С. perfringens и С. absonum. Поэтому необязательно добиваться дополнительной очистки черных коло
ний. выделенных с агаровой среды, перед их посевом на тиогликолатную и затем на лактозо-сульфитную среду.
9.4.2.1 Пересев и инкубирование
Каждую изолированную колонию (см. 9.3) пересевают на жидкую тиогликолатную среду (см. 5.3).
Инкубируют в анаэробных условиях в течение 18— 24 ч при температуре 37 вС.
9.4.2.2 Обработка результатов
Исследуют пробирку с LS средой, учитывая образование газа и наличие черного окрашивания
(осадок сульфита железа). Трубки Дархема, заполненные более чем на одну четвертую часть газом, и
пробирки, содержащие черный осадок, оценивают как положительные.
В сомнительных случаях, когда трубка Дархема в пробирке с почерневшей средой заполнена га
зом менее чем на четверть, без промедления, с помощью стерильной пипетки переносят пять капель
культуры с LS средой (см. 9.4.2.1) в другую пробирку с той же средой. Инкубируют на водяной бане
(см. 6.10) при температуре от 46 °С в течение 18—24 ч. Оценивают эти пробирки, как описано выше.
Бактерии, которые образуют типичные колонии на LS среде и дают положительную реакцию под
тверждения на LS среде, относят к С. perfringens. Во всех прочих случаях пробирки с посевами рассмат
ривают как отрицательные.
9.4.3Методика подтверждения с использованием подвижной нитратной среды и лакто
зо-желатиновой среды
9.4.3.1 Общие положения
Для данной методики подтверждения требуются хорошо изолированные типичные колонии. Если
их нет (т. е. они чрезмерно разрослись на поверхности чашек, и нет возможности выбрать хорошо изо
лированные типичные колонии), засевают пять типичных колоний на предварительно деаэрированные
жидкие тиогликолатные среды (см. 5.3).
Инкубируют в анаэробных условиях при температуре 37 °С в течение 18—24 ч. Штрихуют колонии
на чашках с основным агаром SC (5.2.1.2) и добавляют сверху 10 см7основного агара SC.
7