ГОСТ Р 53212—2008
8.3.2 Раствор Кароза II
7.2 г цинка сернокислого 7-водного (ZnS04 7Н20 ) растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см3
в 70 — 80 см3дистиллированной воды, объем раствора доводятдо метки.
8.3.3 Раствор серной кислоты с концентрацией с (H2S04) = 4 моль/дм3(8 н)
В мерную колбу вместимостью 1000 см3помешают400 — 500 см3дистиллированной воды, медлен
но и осторожно при перемешивании приливают 106.5см3концентрированной серной кислоты с плотностью
1.84 г/см3. Объем растворадоводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.
8.3.4 Раствор гидроокиси натрия с концентрацией с (NaOH) = 0,1 моль/дм3(0,1 н)
В мерную колбу вместимостью 1000 см3помещают 400 — 500 см3дистиллированной воды, осторож
но при перемешивании добавляют 4.0 г гидроокиси натрия. Объем раствора доводят до метки дистиллиро
ванной водой и перемешивают.
8.3.5 Цитратный буфер
3.4 г натрия лимоннокислого трехзамещенного 5,5-водного пищевого (цитрата натрия)
(C6HB0 7Na3■5,5Н20)
и
0,042 г моногидрата лимонной кислоты (С6Н80 7•Н20 ) растворяют в 30 см3дистил
лированной воды в мерной колбе вместимостью 50 см3.Доводят pH раствора до 6.6.Для этого используют
в зависимости от pH полученного раствора растворсерной кислоты с концентрацией
с
(H2S04)=4 моль/дм3
или раствор гидроокиси натрия с концентрацией с (NaOH) = 0,1 моль/дм3. Объем полученного раствора
доводятдистиллированной водой до метки. Полученный раствор устойчив в течение трех мес при темпера
туре 4 °С.
8.3.6 Раствор аммония сернокислого с концентрацией
с
(NH4)2S04= 2,2 моль/дм3 (2,2 М)
29.1 г аммония сернокислого ((NH4bS04) растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см3 в
60 — 70 см3дистиллированной воды, объем раствора доводят до метки.
8.3.7 Раствор 1
Навеску никотинамид адениндинуклеотидфосфат натриевой соли (НАД) массой 0,035 г растворяют в
7 см3цитратного буфера. Полученный раствор устойчив втечение трех недель при температуре 4
°С.
8.3.8 Суспензия 2
Навеску сухого лиофилизата Р-галактозидазы массой 0,005 г суспендируют в 1см3раствора аммо
ния сернокислого с концентрацией с (NH4)jS04= 2.2 моль/дм3. Суспензия устойчива втечение 12 мес при
температуре4 °С.
8.3.9 Раствор 3
Навеску калия дигидроортофосфата (К4Р20 7) массой 8,3 г растворяют в 40 см3дистиллированмой
воды. Доводят pH раствора до 8,6 раствором серной кислоты с концентрацией с (H2S04) =
4
моль/дм3.
Полученный раствор устойчив втечение двух мес при температуре 4 °С.
8.3.10 Суспензия 4
Навеску сухого лиофилизата (i-галактозодегидрогеназы массой 0,005 г суспендируют в 1 см3
раствора аммония сернокислого с концентрацией с (NH4)2S04= 2,2 моль/дм3. Суспензия устойчива втече
ние 12 мес при температуре 4 °С.
Допускается применение набора реактивовдля ферментативного анализа лактозы.
8.4 Проведение измерений
Рассчитывают навеску образца так. чтобы ожидаемая массовая концентрация лактозы составляла
от 0,05 до 1,00 г/дм3.
Навеску образца массой 0.2 — 0,5 г количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3.
В мерную колбу вместимостью 100 см3добавляют 40 — 60 см3дистиллированной воды. Содержи
мое колбы нагревают на водяной бане до температуры 40 °С — 50 °С и перемешивают.
Пипеткой вместимостью 5,0 см3добавляют 5,0 см3раствора Кареза I и 5,0 см3раствора Кареза II,
тщательно перемешивают. Пипеткой вместимостью 10,0 см3добавляют 10,0 см3 раствора гидроокиси
натрия с концентрацией с (NaOH) = 0,1 моль/дм3 до pH (7.5 — 8.5). Раствор перемешивают, доводят до
метки дистиллированной водой и фильтруют. Фильтрат используютдля определения лактозы.
Пипеткой вместимостью 1.0 см3добавляют по 0.2 см3 раствора 1 в кюветы толщиной 1 см для
контроля и для образца. Затем в каждую кювету добавляют по 0,05 см3 суспензии 2.
Пипеткой вместимостью 1.0 см3добавляют 0.1 см3 раствора образца (фильтрата) вкюветудля образ
ца. Перемешивают содержимое кювет легким встряхиванием и выдерживают втечение 20 мин при темпе
ратуре воздуха 20 °С — 25 °С.
В каждую юовету пипеткой вместимостью 1,0 см3 добавляют по 1,0 см3 раствора 3. В контрольную
кювету пипеткой вместимостью 2,0 см3добавляют 2.0 см3дистиллированной воды, а в кюветудля образ ца
— 1.9 см3дистиллированной воды.
6
184