ГОСТ Р 51600- 2000
основного фуксина 50 г/дм’и микроскопнруют.
При наличии в поле зрения 90 %—95
%
свободных сформировавшихся спор колбы с посевами
помешают на 16—18 ч в холодильник для осаждения. Надосадочиую жидкость из колбы сливают, а
осадок pan иваюг по стерильным центрифужным пробиркам и прогревают в водяной бане при темпе
ратуре внутри пробирок (67±2) ’С в течение (30±1) мин. Пробирки центрифугируют 20—30 мин.
Осадок отмывают стерильной дистиллированной водой (не менее трех раз) до получения прозрачной
жидкости над ним.
Взвесьспор вторично прогревают при температуре (67±2) *С втечение (30± 1) мин. 11олученную
взвесь переносят в бактериологические пробирки и хранят вхолодильнике не более 2 мес.
3.4.4 Притотодление засеянной агаровой среды
3.4.4.1 Впробирки отбирают взвесь спор тест-микроба по 3.4.3.1 и разводят стерильной дистилли
рованной водойдо получения суспензии спор, визуально соответствующей 10единицам ноотеческо
мустандарту мутности.
3.4.4.2 К 100 см3расплавленной и охлажденной до (60±2) "С среды по 3.4.2.2 добавляют 2,5 см*
водного раствора глюкозы массовой долей 40
%
и 4 см3суспензии спор по 3.4.4.1. Смесь среды и спор
тщательно перемешивают и рахливают градуированной пипеткой по (11±1) см’ в чашки Петри,
установленные на строго горизонтальной поверхности стола.
3.4.4.3 Чашки засевают непосредственно перед употреблением.
В некоторых случаях чашки хранят вхолодильнике при температуре (5± I)*Сне более 2 сут. Перед
использованием их прогревают в термостате при (55±1) ‘С в течение (20±1) мин.
3.4.5 Приготодтение обезжиренного стерильного молока
3.4.5.1Обезжиренное стерильное молоко получают из цельного молока кислотностью 16—18 Т,
предварительно проверенного на отсутствие ингибирующих веществпо ГОСТ 23454. В пробирки разли
вают обезжиренное молоко по 10 см3и стерилизуют при 10-’ Па (1 атм) в течение (10+1) мин.
Допускается использовать препарат СКИВ.
3.4.6 Приготодтение контрольного разведения стрептомицина активностью 2,5 мкг/см’ (Ед/г)
3.4.6.1 Контрольное разведение стрептомицина используют для проверки активности роста тест-
микроба.
3.4.6.2 Контрольное разведение стрептомицина готовят в фосфатных буферных растворах.
Состав раствора I: двузамещенный фосфорнокислый калий - 2,0 г, однозамешеннын фосфорно
кислый калий —8,0 г, дистиллированная вода - до 1000,0 см3.
В мерной колбе вместимостью 1000 см’ растворяют компоненты в небольшом количестве дистил
лированной воды и доводят объем водой до метки. Усгаиадливают pH раствора по pH-метру, равный
(6,1+0.1), и стерилизуют при температуре (112±2) ’С в течение (30±1) мин. Срок хранения раствора -
не более 30 сут при температуре (5±1) ‘С.
Состав раствора 2:двузамещенный фосфорнокислый калий - 16.73 г,однозамешенный фосфор
нокислый калий —0,523 г, дистиллированная вода —до 1000,0 см3.
Вмерной колбе вместимостью 1000 см3растворяют компоненты в небольшом количестве дистил
лированной воды и доводят объем водой до метки. Устанавливают pH раствора по pH-метру, равный
(7.9+0.1), и стерилизуют при температуре (112±2) ’С втечение (30±1) мин. Срок хранения раствора —
не более 30 сут при температуре (5± 1) ‘С.
3.4.6.3 Контрольное разведение готовят из основного раствора стрептомицина активностью
500 мкг/см3, который получают растворением 5 мг стандарта антибиотика, взвешенного с отсчетом
показания весов до 0.1 мг, вбуферном растворе 1по 3.4.6.2. Объем буферного раствора составляет
0,01 активности антибиотика.
П ри м е р: При активности стандарта стрептомицина 760 мкг/мг навеску антибиотика (5 мг)
растворяют в 7,6 см3буферного раствора 1и подумают основной раствор активностью 500 мкг/см3.
Основной раствор атибиотика хранят в посуде из темного стекла с притертой пробкой не более
30 сут при температуре (5±1) *С.
Из основного раствора в трех пробирках готовят серию разведений антибиотика. В первую про
бирку наливают 1 см3буферного раствора 2 по 3.4.6.2 и I см3основного раствора, во вторую - 9 см3
буферного раствора 2 и I см3раствора из первой пробирки, втретью —9 см3стерильного обезжирен
ного молока по 3.4.5 и 1 см3раствора из второй пробирки. Активность антибиотика в разведениях
составляет соответственно 250; 25 и 2,5 мкг/см3. Разведение антибиотика в молоке активностью
2,5 мкг/см3 является контрольным.
Контрольное разведение стрептомицина используют втечение рабочего дня.
3