С. 10 ГОСТ 11285—93
установления в нем pH (3.5±0.1) (потениномстрнчески) 180 г/дм*
раствором соляной кислоты направляют на сорбцию.
Сорбцию инсулина осуществляют на предварительно подготов
ленном катионите КУ 23 И, помещенном в количестве (60=5) г
в стеклянную колонку диаметром (30±5) мм и высотой (!С0±
±50) мм. путем подачи экстракта сверху со скоростью (10±
±2) см3/мин. По окончании сорбции пропускают 700 г/дм1 раст
вор этилового спирта со скоростью (10±2) см3/мин до полного
удаления следов жира.
Окончание обезжиривания определяют в пробирке но исчезно
вению мутного жирового кольца при наслаивании 1—2 см9 исхо
дящего из колонки спиртового раствора на 5—6 см* воды.
Затемудаляютбалластныебелкипутемпропускании
0,2 моль/дм» раствора аммония уксуиокислого с pH (5,25±0,05) со
скоростью (10± 2) см3/.мин. Расход раствора аммония уксусно
кислого составляет 3 дм3 на 60 г катионита. Полноту удаления
балластных веществ контролируют спектрофотометрически при
длине волны 280 нм. Оптическая плотность не должна превышать.
0.05.
Десорбцию инсулина осуществляют путем пропускания чере^
колонку 0,2 моль/дм3 раствора аммония хлористого с pH (9,5
±0,2) со скоростью (2±1) см3/мин. Начало сбора элюата опре
деляют по появлению помутнения при добавлении 0,3 см3 элю ата
к 0,3 см3 раствора трихлоруксусной кислоты концентрации 100
г/дм3. Конец элюирования определяют по слабоположитель
ной реакции с 100 г/дм3 раствором трихлоруксусной кислоты или
спсхтрофотометрическн до оптической плотности нс меньше 0.05.
Объем элюата измеряют в кубических сантиметрах, определя
ют его активность методом круговой бумажной хроматографии.
D
,
П р и м е ч а н и е Перед нанесением на хроматограмму ».тюат спиной под
желудочнойжелезы разбавляют дистиллированной водой, подкисленной
1 моль/дм* раствором соляной кислоты до pH (2,5±0,1), я соотношении 1: I.
Соответственно я формуле расчета массовой доли инсулинаумножают на 2.
По окружности бумаги для хроматографирования на расстоя нии
2 см от центра круга пипеткой наносят по 0,02—0.03 см3
элюата (в четыре точки) и стандартного раствора инсулина (в
две точки). Диаметр хроматограммы 20 см. Хроматограммы по
мещают в мелкие тарелки диаметром около 20 см, куда предва
рительно наливают систему растворителей (50±5) см3. Бумаж
ный круг соединяют с системой растворителей при помощи фити
ля, сделанного из той же бумаги, и накрывают тарелкой.
Процесс хроматографирования осуществляют при температуре-
18—25°С в течение 3 ч. По окончании процесса хроматографнро-