ГОСГ 18963-73 С. 8
На обезжиренное спиртом предметное стекло наносят петлей одну каплю
дистиллированной воды (при приготовлении препарата из колоний на плотных
средах) или одну каплю бульонной культуры. В каплю дистиллированной воды
вносят небольшое количество микробных клеток из анализируемой колонии
или газона чистой культуры на плотной среде. Затем в каплю вносят петлей одну
каплю реактива № 1, распределяют смесь по стеклу и подсушивают мазок при
комнатной температуре. Затем фиксируют на пламени горелки, промывают водой,
просушивают фильтровальной бумагой и наносят реактив № 2. покрывая им всю
поверхность стекла, на 1—5 мни (продолжительность окраски не влияет на ее
результат). Тщательно и быстро прополаскивают препарат водой, просу шивают
фильтровальной бумагой, микроскопнруют. При приготовлении на одном
стекле нескольких мазков на лицевую сторону стекла наносят восковым
карандашом линии, делящие поверхность стекла на необходимое количество
квадратов.
3.3.15.Пригото&кмиереактива для определения оксидатой активности бак
терий
30—40 мг а-нафтола растворяют в 2,5 см* ректификованного этилового
спирта, прибавляют 7,5 см* дистиллированной воды и растворяют 40—60 мг
диметил-л-фенилендиамина. Раствор готовят непосредственно перед определе
нием.
Оксидазный тест предназначается для дифференциации бактерий семейства
Eliterobacteriaceae от неотрицательных бактерий семейства Pscudomonadaceae и
других водных сапрофитных бактерий, которые обладают активным фермен том
оксидазой и окисляют фенилендиаминовые соединения до индофенола ярко-
синего цвета.
3.3.15.1. Постановка оксидазного теста при работе методом мембранных
фильтров
Мембранный фильтр с выросшими на нем колониями бактерий переносят
пинцетом, не переворачивая, на кружок фильтровальной бумаги несколько
большего диаметра, чем фильтр, обильно смоченный реактивом. Через 2—4 мин
определяют результат. Все посиневшие колонии или с синим ободком не
относятся к семейству Enterobacteriaceae, их учитывают.
Колонии, не изменившие своего первоначального цвета, в подавляющем
большинстве образованы бактериями группы кишечных палочек, но среди
них могут быть кокки, спорообразующие и грамотринательные палочки, не
имеющие санитарно-показательного значения, которые не учитывают после
микроскопнрования и отсутствия образования газа на полужидкой среде с
глюкозой при (37 ± 0,5) *С. Учитывая бактерицидность реактива для опреде
ления оксидазной активности, мембранный фильтр сразу же после
четкого проявления реакции переносят обратно на среду Эндо и
немедленно (не позднее чем через 5 мин) пересеивают
оксидазоотрицательные колонии в полужидкую среду с глюкозой.
3.3.15.2. Постановка оксидазного теста при работе бродильным методом
По 2—3 изолированные колонии каждого типа, выросшие на секторах среды
Эндо, снимают петлей или стеклянной палочкой и наносят штрихом на фильт
ровальную бумагу’, смоченную реактивом. В месте нанесения бактериальной
массы бумага не изменяет цвета, если оксидазный тест отрицательный, и синеет в
течение 1 мин. если бактерии имеют активную оксидазу. Исследование изо-
875