ГОСТ Р 54655―2011
6
С1С1П3
П3П11П11П19П19
П27П27П35П35
С2С2П4
П4П12П12П20П20
П28П28П36П36
С3С3П5
П5П13П13П21П21
П29П29П37П37
С4С4П6
П6П14П14П22П22
П30П30П38П38
С5С5П7
П7П15П15П23П23
П31П31П39П39
С6С6П8
П8П16П16П24П24
П32П32П40П40
П1П1П9
П9П17П17П25П25
П33П33П41П41
П2П2П10
П10П18П18П26П26
П34П34П42П42
Рисунок 1 — Пример формы записи координат лунок
(С — стандартные растворы, П — анализируемые пробы)
6.4.9.2 Одноканальным дозатором по 6.2.2 добавляют по 0,050 см
3
стандартных и анализируемых
растворов в соответствующие пары лунок.
6.4.9.3 Восьмиканальным дозатором по 6.2.3 добавляют по 0,050 см
3
раствора антител в каждую лун-
ку. Перемешивают растворы в лунках вручную легкими круговыми движениями рамки планшета по поверх-
ности стола. Ставят в темное место на инкубацию в течение 1 ч при комнатной температуре 20 °С — 25 °С.
6.4.9.4 Резко переворачивают планшет и выливают жидкость из лунок, выбивают капли жидкости,
оставшиеся в лунках энергичным трехкратным постукиванием рамки с лунками по столу, покрытому
фильтровальной бумагой по 6.2.23. Каждую лунку заполняют 0,250 см
3
моющего буфера с твином 20 по
6.4.4 и снова удаляют раствор из лунок. Выбивают капли жидкости, как описано выше. Повторяют
процедуру промывки лунок моющим буфером еще два раза.
6.4.9.5 Восьмиканальным дозатором добавляют в каждую лунку по 0,100 см
3
раствора конъюгата.
Тщательно перемешивают растворы в лунках вручную. Ставят в темное место на инкубацию в течение
15 мин при температуре 20 °С — 25 °С.
6.4.9.6 Освобождают и промывают лунки по 6.4.9.4.
6.4.9.7 Восьмиканальным дозатором в каждую лунку добавляют по 0,100 см
3
субстрата/хромо-
гена. Тщательно перемешивают растворы в лунках вручную. Ставят в темное место на инкубацию в
течение 15 мин при температуре 20 °С — 25 °С.
6.4.9.8 Восьмиканальным дозатором в каждую лунку добавляют по 0,100 см
3
стоп-реагента и тща-
тельно перемешивают растворы в лунках вручную. Планшет помещают в микропланшетный фотометр,
измеряют оптическую плотность в каждой лунке при 450 нм. Измерения проводят в течение 30 мин по-
сле добавления стоп-реагента.
6.5 Обработка результатов анализа
6.5.1 Для обработки результатов измерений на компьютере используют программное обеспече-
ние RIDASOFT Win. В этом случае окончательный результат выражен в микрограммах на килограмм.
6.5.2 Обработка результатов без использования компьютера
Среднеарифметическое значение двух параллельных определений оптической плотности, измерен-
ной в лунках со стандартными или анализируемыми растворами, делят на среднеарифметическое значе-
ние оптической плотности, измеренной в лунках с нулевым стандартом (С1), результат умножают на 100.
Относительное поглощение или процент поглощения вычисляют по формуле
×
100.
С
реднее
з
н
а
чение
оп
т
иче
ск
ой
пло
т
но
ст
и
ст
а
нд
а
р
т
а
(
или
пробы
)
(1)
С
реднее
з
н
а
чение
оп
т
иче
ск
ой
пло
т
но
ст
и
нулево
г
о
ст
а
нд
а
р
т
а
Примечание — Если величина оптической плотности, измеренной в лунке с нулевым стандартом, мень-
ше 0,6, то это может быть признаком порчи реагентов. В этом случае следует заменить реагенты и повторить
определение.
По величинам относительного поглощения, вычисленным для стандартных растворов, и соот-
ветствующим известным значениям концентрации тетрациклина в микрограммах на килограмм строят
градуировочную кривую в полулогарифмической системе координат.