ГОСТ Р 54655―2011
7.4.8.5 Восьмиканальным дозатором добавляют в каждую лунку по 0,100 см
3
раствора субстрата/
хромогена. Тщательно перемешивают растворы в лунках вручную. Ставят в темное место на инкуба-
цию в течение 15 мин при температуре 20 °С — 25 °С.
7.4.8.6 Восьмиканальным дозатором в каждую лунку добавляют по 0,100 см
3
стоп-реагента и тща-
тельно перемешивают растворы в лунках вручную. Планшет помещают в микропланшетный фотометр,
измеряют оптическую плотность в каждой лунке при 450 нм. Измерения проводят в течение 30 мин по-
сле добавления стоп-реагента.
Примечание — При расчете массовой доли левомицетина в анализируемых пробах учитывают фоно-
вый сигнал с помощью постановки холостого опыта. Для этого в каждой серии анализов ставят контрольную пробу
без меда, то есть испаряют чистый этилацетат и затем следуют описанной стандартной процедуре. Измененный
фоновый сигнал вычитают на стадии обработки результатов.
7.5 Обработка результатов анализа
Построение градуировочной кривой проводят для каждой серии определений.
7.5.1 Для обработки результатов измерений на компьютере используют программное обеспече-
ние RIDASOFT Win. Окончательный результат выражают в нанограммах на килограмм.
7.5.2 Обработка результатов без использования компьютера
Среднее из двух параллельных значений оптической плотности, измеренной в лунках со стан-
дартными или анализируемыми растворами, делят на среднее значение оптической плотности, изме-
ренной в лунках с нулевым стандартом (С1), результат умножают на 100.
Относительное поглощение или процент поглощения вычисляют по формуле
×
100.
С
реднее
з
н
а
чение
оп
т
иче
ск
ой
пло
т
но
ст
и
ст
а
нд
а
р
т
а
(
или
пробы
)
(5)
С
реднее
з
н
а
чение
оп
т
иче
ск
ой
пло
т
но
ст
и
нулево
г
о
ст
а
нд
а
р
т
а
Примечание — Если величина оптической плотности, измеренной в лунке с нулевым стандартом, мень-
ше 0,6, то это может быть признаком порчи реагентов. В этом случае заменяют реагенты и повторяют определение.
По величинам относительного поглощения, вычисленным для стандартных растворов, и соответ-
ствующим известным значениям концентрации ХАФ в нанограммах на килограмм строят градуировоч-
ную кривую в полулогарифмической системе координат.
Массовую долю ХАФ в анализируемой пробе меда в нанограммах на килограмм определяют по
градуировочной кривой в соответствии с относительным поглощением, измеренным и вычисленным
для каждого раствора.
Для определения массовой доли ХАФ в анализируемой пробе меда в микрограммах на килограмм
величину концентрации ХАФ, полученную по градуировочной кривой, умножают на 1 (коэффициент раз-
бавления при выполнении анализа в точном соответствии с приведенной методикой) и делят на тысячу
(для перевода в микрограммы на килограмм).
Вычисления проводят с записью результата до второго десятичного знака.
Окончательный результат записывают с точностью до первого десятичного знака.
За окончательный результат определения принимают среднеарифметическое значение результа-
тов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости
M
Х
А
Ф
,1
−
M
Х
А
Ф
,2
£
r, r
=
2,8
×s
r
×
0,01
×
M
Х
А
Ф
,
(6)
ХАФ,1ХАФ,2
r
где Ми М— значения результатов параллельных определений остаточных количеств хлор-
амфеникола;
r— предел повторяемости для двух результатов параллельных определений при до-
верительной вероятности Р = 0,95 (таблица 5);
— показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение
повторяемости) при доверительной вероятности Р = 0,95;
M
Х
А
Ф
— среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений
остаточных количеств хлорамфеникола.
7.6 Точность метода
11
Статистический анализ результатов испытаний по оценке точности метода проводят в соответ-
ствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-6. Диапазон измерений массовой доли левомицетина (хлорам-
феникола),
для
которого
рассчитаны
метрологические
характеристики,
составляет
0,075—0,750
мкг/кг.