ГОСТ Р 54655―2011
роторного испарителя или высушиванием в токе азота при температуре 60°С с использованием микро-
испарителя по 7.2.1.
Сухой остаток растворяют в 0,5 см
3
буфера по 7.3.1.6 (из набора) на шейкере (10 мин) и в ультра-
звуковой ванне (30 мин).
7.4.5 Приготовление реагентов для анализа
Перед применением набора доводят температуру всех реагентов до комнатной в пределах
20 °С — 25 °С, а после использования охлаждают все оставшиеся реагенты до 2 °С — 8 °С.
В процессе выполнения анализа нельзя допускать высыхания лунок планшета. На всех стадиях
определения следует избегать воздействия прямого солнечного света.
Растворы стандартов ХАФ, субстрата/хромогена, стоп-реагента, входящие в состав набора, по-
ставляются в готовом к употреблению виде. Перед употреблением достаточно вскрыть флакон.
7.4.6 Приготовление раствора коньюгата
Конъюгат ХАФ с ферментом — концентрат. Так как этот раствор ограниченно стабилен, перед
анализом разбавляют только требуемое количество.
Флакон с концентратом аккуратно встряхивают, в одноразовую стеклянную виалу вместимостью
1,5 см
3
дозатором отбирают конъюгат и буфер по 7.3.1.6 (из набора) в соотношении 1:10. Раствор тща-
тельно перемешивают.
На 4 стрипа по 8 лунок достаточно смешать 0,2 см
3
концентрата и 2 см
3
буфера по 7.3.1.6.
7.4.7 Подготовка микротитровального планшета
Перед выполнением анализа из планшета необходимо извлечь необходимое количество стрипов.
Оставшиеся стрипы следует тщательно упаковать в фольгированный пакет вместе с осушителем, гер-
метично закрыть пакет и поместить на хранение при температуре 2 °С — 8 °С.
7.4.8 Порядок проведения анализа
7.4.8.1 В рамку планшета вставляют стрипы (лунки) в количестве, необходимом для выполнения
всех запланированных определений (стандартные растворы и образцы) в двух повторностях. Записы-
вают координаты лунок, предназначенных для стандартных растворов и подготовленных исследуемых
растворов. Пример формы записи координат лунок представлен на рисунке 2.
С1С1П3
П3П11П11П19П19П27П27П35П35
С2С2П4
П4П12П12П20П20П28П28П36П36
С3С3П5
П5П13П13П21П21П29П29П37П37
С4С4П6
П6П14П14П22П22П30П30П38П38
С5С5П7
П7П15П15П23П23П31П31П39П39
С6С6П8
П8П16П16П24П24П32П32П40П40
П1П1П9
П9П17П17П25П25П33П33П41П41
П2П2П10
П10П18П18П26П26П34П34П42П42
Рисунок 2 — Пример формы записи координат лунок
(С — стандартные растворы, П — анализируемые пробы)
10
7.4.8.2 Одноканальным дозатором по 6.2.2 добавляют по 0,050 см
3
стандартных и анализируемых
растворов в соответствующие пары лунок.
7.4.8.3 Восьмиканальным дозатором по 6.2.3 на дно каждой лунки добавляют по 0,050 см
3
раз-
бавленного раствора конъюгата по 7.4.6. Осторожно перемешивают раствор в лунках вручную легкими
круговыми движениями рамки планшета по поверхности стола. Ставят в темное место на инкубацию в
течение 1 ч при комнатной температуре 20 °С — 25 °С.
7.4.8.4 Резко переворачивают планшет и выливают жидкость из лунок, выбивают капли жидкости,
оставшиеся в лунках, путем энергичного трехкратного постукивания рамки с лунками по столу, покрыто-
му фильтровальной бумагой по 6.2.23. Каждую лунку заполняют 0,250 см
3
рабочего раствора моющего
буфера по 7.4.3 и вновь удаляют раствор из лунок. Выбивают капли жидкости, как описано выше. По-
вторяют процедуру промывки лунок моющим буфером еще два раза.