ГОСТ Р 54653—2011
17
температуре в течение пяти — десяти дней. Когда появляются отдельные бактериальные колонии, на
них наносят по капле реактива Грисса по ГОСТ 4517. Покраснение указывает на образование нитратов из
аммония, введенного в состав среды.
9.6 Метод выявления денитрифицирующих бактерий
9.6.1 Полную денитрификацию до образования газообразных продуктов проводят только прока-
риоты. Большинство их относится к родам Psеudomonas, Micrococcus и Bacillus. Денитрифицирующие
бактерии определяют обычно на жидкой среде Гильтая по 6.19 или среде Березовой по 6.20.
9.6.2 Среду Гильтая наливают высоким слоем в пробирки вместимостью 20—25 см
3
и стерилизу-
ют в автоклаве при давлении 50,7 кПа в течение 20 мин.
Среду Березовой наливают высоким слоем в пробирки вместимостью 20—25 см
3
и стерилизуют
при давлении 101,3 кПа в течение 20 мин.
9.6.3 Стерильную среду засевают из третьего — восьмого разведений, инкубируют в течение семи
дней при температуре 25 °С — 30 °С. Среда в пробирках синеет, образуются пузырьки газов, от развив-
шихся бактерий мутнеет. Численность денитрифицирующих бактерий определяют методом предель-
ных разведений. Наблюдения проводят на третьи — пятые — седьмые сутки.
9.7 Метод выявления автохтонной микрофлоры
9.7.1 Из группы автохтонных микроорганизмов в органических удобрениях чаще всего встречают-
ся представители родов Nocardia, Micromonospora, Baсtoderma и Arthrobacter.
9.7.2 Представителей автохтонной микрофлоры выявляют на нитритном агаре, приготовленном
по методу Виноградского по 6.21.
9.7.3 Посев проводят из четвертого-пятого разведения по 0,05 см
3
суспензии, инкубируют при
температуре 26 °С — 28 °С в термостате в течение одной недели. Колонии учитывают под микроскопом
при малом увеличении (окуляр 10
×
, объектив 3
×
или окуляр 10
×
, объектив 8
×
).
9.7.4 Определяют площадь чашки Петри (Р) и площадь поля зрения (р). Разделив площадь чашки
на площадь поля зрения, получают коэффициент K = Р/р, на который умножают среднее число колоний
в поле зрения по чашке. В чашке учитывают не менее 50 полей зрения, затем выводят среднеарифме-
тическое значение результатов на одно поле.
9.8 Метод выявления азотфиксирующих микроорганизмов (диазотрофов)
9.8.1 Среди свободноживущих азотфиксирующих бактерий наибольший интерес представляют
виды родов Clostridium и Azotobacter.
9.8.2 Для учета Cl. pasteurianum используют синтетическую безазотистую среду по 6.22. Среду
стерилизуют при давлении 101,3 кПа в течение 20 мин. Перед посевом добавляют 1 см
3
дрожжевой
воды по 6.30. Среду, энергично перемешивая, разливают в пробирки высоким слоем (до 2/3 объема
пробирки).
9.8.3 Вносят в каждую пробирку 1 см
3
суспензии из второго, третьего, четвертого, пятого разведе-
ния. Наблюдения ведут по газообразованию на третьи — пятые — седьмые сутки. Пробирки инкубиру-
ют при температуре 28 °С — 30 °С. Признаками развития бактерий являются также помутнение среды
и характерный запах масляной кислоты. Численность определяют методом предельных разведений.
9.8.4 Для учета Cl. pasteurianum используют среду Емцева по 6.23.
9.8.5 Посев и учет проводят по 9.8.3.
9.8.6 Наличие клостридиев в культуре определяют при микроскопировании препаратов «раздав-
ленная капля» с раствором Люголя.
9.8.7 Для определения количества клеток аэробного азотофиксатора — Azotobacter chroococcum
применяют метод предельного разведения, используя жидкую среду Бейеринка по 6.24.
9.8.8 Пробирки инкубируют при температуре 28 °С — 30 °С, учет проводят на пятые — седьмые
сутки. При наличии азотобактера на поверхности среды образуется пленка.
9.8.9 Для учета азотобактера используют также посев на плотную среду Эшби по 6.25. Чашки ин-
кубируют при температуре 28 °С — 30 °С в течение пяти — семи суток.